葡萄再生体系的建立及葡激酶基因（sak）植物表达载体的构建

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中文摘要：本实验以摩尔多瓦（Moldova）、巨峰（Kyoho）和巨玫瑰（Jumeigui）葡萄（VitisViniferaL．）的幼胚、卷须和叶片为外植体，用组织培养的方法建立了葡萄体细胞胚胎发生途径的植株再生体系，并且构建了含有葡激酶基因（sak）的植物表达载体pBISAK和pBIPMI—SAK，对葡萄遗传转化进行了初步研究，为用葡萄体胚作为受体材料进行遗传转化生产葡激酶奠定了基础。论文主要分为两个部分：一、以葡萄品种摩尔多瓦、巨峰和巨玫瑰为材料，通过控制外植体来源、激素水平、冷处理时间等，对体细胞胚胎发生和植株再生进行了研究，主要研究结果如下： 1、来自不同品种的幼胚诱导愈伤组织能力不同，其中巨峰诱导率高于巨玫瑰和摩尔多瓦。 2、对摩尔多瓦种子进行冷处理能明显提高幼胚产生愈伤组织的能力，当冷处理为10天时，其值达到92．7%，远远高于不经冷处理时的37．9%。 3、幼胚是诱导体胚比较合适的外植体，在相同条件下，只有幼胚能产生胚性愈伤组织，而卷须和叶片仅产生非胚性愈伤组织。 4、不同浓度NAA和6—BA组合实验结果发现，激素浓度不同，愈伤组织的形态和生长速度有一定的差异，NN+0．5mg/L6—BA+2mg/LNAA是比较合适的摩尔多瓦胚性愈伤组织增殖培养基。 5、无激素的MS1/2培养基是比较合适的体胚分化培养基。组织化学研究表明体胚经历了与合子胚相似的发育阶段，即球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚，在发育过程中淀粉和蛋白质含量呈动态变化。 6、6—BA能明显提高植株再生率，当6—BA浓度为1mg/L时，植株再生率达到43．3%。 7、葡萄体胚对卡那霉素比较敏感，含30g/L甘露糖的MS1/2培养基可用作葡萄遗传转化的筛选培养基。二、利用分子克隆技术成功地构建了含甘露糖筛选标记基因（pmi）和葡激酶基因（sak）植物表达载体，并将其转入到根癌农杆菌菌株GV3101中，转化葡萄胚性愈伤组织，获得了GUS检测为阳性的体胚。为下一步进行葡萄遗传转化，获得能表达葡激酶的安全转基因植株奠定了基础。再生体系

作者：

李慧

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关键词：

葡萄愈伤组织再生体系细胞胚胎发生遗传转化葡激酶甘露糖

授予学位：

硕士

学科专业：

植物学

导师：

李凤兰、陆海

学位年度：

2008

学位授予单位：

北京林业大学

语种：

中文

中图分类号：