摘要
中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)为石蒜科水仙属多年生球根花卉，是法国水仙(Narcissus tazetta)的一个变种。中国是世界重要的水仙生产及出口国之一，久负盛名的中国水仙不仅是中国著名的十大传统名花之一，更是中国传统出口花卉中的佼佼者[12]。但近年来，我国在水仙生产中存在的品种单一、病虫害增多，品质下降等问题日益显现，因此需要进行水仙育种基础性研究，为培育新品种打下坚实的基础。一直以来，对漳州水仙的染色体起源问题都不是很明确，而且研究大多是局限在细胞学水平，分子水平研究甚少，作者认为对漳州水仙有代表性的第7号染色体的3条随体染色体的研究，将对探索漳州水仙的染色体起源问题及指导水仙新品种的选育有较大的意义。 本研究以漳州水仙为材料，探索了漳州水仙随体染色体数，通过染色体微分离、微克隆技术建立了两条随体染色体(第7号染色体)单染色体DNA文库，并且把该技术与单酶切AFLP分子标记技术相结合，建立了两条染色体分子标记。主要内容及结论如下： 1.漳州水仙的随体染色体 漳州水仙为三倍体，2n=3x-30，其中第7号染色体的3条染色体均为随体染色体，但3条随体染色体形态不同。当染色体预处理时间过长时，其中一条随体收缩过短，光学显微镜下难以辨认。 2.漳州水仙随体染色体DNA文库的构建 用玻璃针显微分离出漳州水仙两条随体染色体，经LA-PCR扩增得到200～2500bp的DNA片段；Southern杂交表明，扩增片段与漳州水仙基因组DNA之间有同源性，从而证明漳州水仙带随体染色体DNA已经被成功扩增；将扩增产物克隆到PMD18-T载体中，约获得5.0×105个和3.7×105个克隆，经EcoRⅠ、HindⅢ酶切鉴定插入片段大小为300～2000bp。 3.两条染色体的AFLP分子标记 将LA-PCR技术与单酶切AFLP分子标记结合，以LA-PCR接头序列为依据，设计引物，通过变性聚丙烯酰胺胶电泳与银染技术，建立了两条染色体的分子标记，并且选取17对引物，对两条染色体扩增出来的谱带进行分析，其中两组谱带相同条带比率约为58.8%，初步得出该两条染色体并非同源染色体。
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