花生种子是花生收获的主要目标产物，它决定花生的产量和品质的形成。但是花生种子在生长过程中容易受到黄曲霉等病菌的侵染。本研究的主要目的是：(1)在已经获得的花生果种皮差异表达基因片段的基础上，通过构建花生果种皮全长cDNA文库并筛选该全长基因；(2)对筛选的基因进行表达模式研究，并通过Tail-PCR克隆其上游启动子序列，为花生遗传转化提供果种皮特异表达启动子，使外源抗性基因蛋白在花生果种皮表达而果仁中不表达，有利于解决转基因食品中存在的安全性问题。主要研究结果如下： 1.构建了一个花生果种皮全长cDNA文库，采用基于PCR技术的逐步浓缩法筛选到三个花生果种皮全长基因：AhPSG8、AhPSG13、AhPSC11。测序结果表明，AhPSG8基因cDNA全长1118bp，起始密码子ATG位于33-35个核苷酸处。开放阅读框从第33个碱基始至833个碱基止，编码266个氨基酸残基组成的多肽，该基因编码的蛋白含有多个活性位点；AhPSG13基因cDNA全长1369bp，开放阅读框从第28个碱基始到1122个碱基止，编码364个氨基酸；AhPSC11基因全长609bp，开放阅读框从第67个核苷酸始至462个核苷酸止，编码131个氨基酸。这三个基因均为新基因，将其登陆在NCBI/GeneBank上。 2.半定量RT-PCR研究所获得的上述基因在不同器官的表达发现这三个基因均为花生果种皮特异表达基因。根据已经获得的AhPSG8和AhPSC11基因全长序列，通过染色体步移技术克隆了其上游启动子序列：生物信息学分析表明，AhPSC11基因上游683bp启动子序列中含有TATA Box、CAAT Box、ATCT-motif、GAG-motif. GARE-motif和sp1等多个与转录有关的结构域；AhPSG8基因上游获得了一个1551bp的核苷酸片段，但是该片段仅与基因上游部分序列重叠，推测为内含子序列，有待进一步验证。 目前，分子生物学技术发展迅速，但是就花生方面研究而言，总体来讲相对薄弱。本试验可以一定程度上增强花生基础理论研究，丰富花生功能基因组学研究内容，为最终解决花生生产问题奠定基础。
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