摘要
久效磷（C7H14NO5P）是一种应用广泛有机磷农药，对哺乳动物、鱼类、鸟类等广泛的生物都具有强的毒性作用。因此，建立一种快速、简便、费用低廉的检测久效磷在粮食、蔬菜、水果中的残留量的方法是十分必要的。目前检测主要方法是色谱技术，费时费力，而免疫测定技术（ELISA）却有着灵敏、高效，同时检测大批量样品的的优点，最近几年得到很快的发展。 虽然最近几年应用单克隆抗体用于农药残留检测有许多报道，但国内外尚未发现ELISA法检测久效磷残留的相关研究。 本研究利用戊二醛法合成了久效磷人工抗原，用紫外光谱法、SDS-PAGE鉴定合成成功，并用定磷法测得Mcp免疫原（Mcp-OVA）中Mcp与OVA的结合比为25：1，包被原（Mcp-BSA）中Mcp与BSA的结合比为19：1。Mcp-OVA免疫老鼠，通过抗血清ELISA方阵滴定曲线确定，最适包被浓度0.5μg／mL，最佳抗体工作浓度为4000×稀释的抗血清。通过间接抑制ELISA曲线得知抑制率为50％时Mcp的检出浓度为0.023μg/mL。间接ELISA检测获得了高效价的抗久效磷多克隆抗体（滴度1：1.28×105）。细胞融合后，通过有限稀释法获得了能稳定分泌抗久效磷的单克隆抗体的细胞株3G4，染色体数为97～104条，单克隆抗体亚型为IgM，效价为1：1.28×104。为进一步建立久效磷的ELISA分析方法，并应用于农药残留分析打下了基础。
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