摘要
目的： 1.研究纳米磁流体作为重组质粒pEGFP-AFP-TK转染入肝癌细胞的一种基因载体。 2.探讨重组质粒pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2的杀伤作用 方法：通过纳米磁流体将前期已经构建成功的含AFP增强子和报告基因绿色荧光蛋白（EGFP）以及目的自杀基因TK的重组质粒pEGFP-AFP-TK分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性的肝癌细胞SMMC7721。当转染20，40，60小时分别于荧光显微镜下动态观察绿色荧光蛋白基因的表达；取获得最佳转染效率的DNA/基因转染载体的复合物比例进行细胞转染，流式细胞计数以定量比较不同基因转染载体的转染效率。转染40小时后，用RT-PCR和Western-blot分析肝癌细胞HepG2中目的基因TK的表达情况。MTT法检测转染重组TK质粒后的HepG2细胞在更昔洛韦（GCV）作用下的存活率并观察旁观者效应，用流式细胞术分析HepG2细胞的凋亡。 结果：纳米磁流体能将重组质粒pEGFP-AFP-TK转入AFP表达阳性的HepG2细胞并获得表达，作为肝癌基因治疗的一种基因载体，其转染效率高于脂质体；采用AFP增强子可使目的基因在AFP表达阳性的HepG2细胞中特异性表达，RT-PCR及Western-blot证明了只有转染的HepG2细胞才有目的基因TK的表达；MTT及流式细胞术表明在前药更昔洛韦（GCV）的作用下，能使AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2被杀伤，以及发生凋亡及旁观者效应。 结论： 1.纳米磁流体能将重组质粒pEGFP-AFP-TK转染HepG2细胞并获得表达，可作为肝癌基因治疗的转染载体。 2. AFP增强子能使目的基因TK在AFP阳性的HepG2肝癌细胞中特异性的表达，并且在前药GCV的作用下，能使HepG2发生凋亡及旁观者效应，而对AFP阴性SMCC7721却无明显作用。
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