摘要
目的：研究上海交通大学附属第一人民医院铜绿假单胞菌（PA）对常用抗菌药物的耐药状况，以及PA对亚胺培南耐药的分子生物学机制，为临床合理用药，减少耐药的发生提供依据。 方法：收集本院2006年9月至2007年8月临床各科送检的住院患者标本，进行常规分离培养，检测出PA，用琼脂倍比稀释法测定亚胺培南耐药或中介的PA对11种常用抗菌药物的最低抑菌浓度MICs，了解我院PA的耐药情况，并筛选出亚胺培南的耐药菌株。选择以肠杆菌科基因重复序列为引物的聚合酶链反应（ERIC-PCR）方法对耐亚胺培南PA的DNA进行PCR扩增，进行分子生物学分型，了解我院耐亚胺培南PA的感染是否为同一起源的菌株引起；选取金属酶流行基因型别（IMP－1型和VIM－4型基因）对耐亚胺培南的PA的DNA进行PCR扩增，并与标准产酶菌株比对，确定本院金属酶流行的主要基因型；提取亚胺培南耐药菌株和敏感菌株的外膜蛋白，采用SDS－PAGE法分离，测定外膜蛋白OprD2含量，并比较耐药菌株及敏感菌株的外膜蛋白OprD2含量。 结果： 1.耐药情况：2006年9月至2007年8月本院共分离到PA 161株，应用琼脂倍比稀释法检出耐亚胺培南的PA 22株，占同期全部检出铜绿假单胞菌161株的13.7%。22株耐亚胺培南的PA对其他10种受试抗菌药物的敏感性，以哌拉西林/他唑巴坦最为敏感，敏感率为72.7%，其次为哌拉西林和头孢哌酮，敏感率分别为68.2%和63.7%。亚胺培南耐药的PA对美罗培南的敏感率为50%。22株耐亚胺培南的PA对环丙沙星耐药率最高，为68.2%。另外，发现3株对11种受试抗菌药物全部耐药的多重耐药株。22株耐亚胺培南的PA主要分离自呼吸道标本。 2.耐亚胺培南铜绿假单胞菌的分子生物学研究： （1）ERIC-PCR方法对耐亚胺培南的PA进行分子生物学分型，22株亚胺培南耐药株分为18型，其中有4个型别含2株耐药菌，提示我院未曾出现过PA的暴发流行； （2）22株亚胺培南耐药株中，发现1株产IMP-1型基因的耐药菌株，但未扩增出VIM-4型金属酶基因； （3）SDS－PAGE结果分析，与亚胺培南敏感菌株相比，耐药菌株的外膜蛋白OprD2缺失或条带较淡，进一步半定量分析发现耐药菌株外膜蛋白OprD2含量明显低于敏感菌株，差别具有显著性意义。 结论： 1.上海交通大学附属第一人民医院PA对亚胺培南的耐药率为13.7％，PA主要分离自呼吸道标本。 2.（1）22株耐亚胺培南的PA分为18型，其中有4个型别含2株耐药菌，提示我院未曾出现过铜绿假单胞菌的暴发流行，但需引起临床医师注意。 （2）对亚胺培南耐药的22株PA中发现1株产IMP-1型金属酶基因的耐药菌株，未检出VIM-4型基因阳性的菌株，说明产IMP-1型金属酶可能是本院耐亚胺培南PA的耐药机制之一。 （3）耐药菌株的外膜蛋白OprD2含量明显低于敏感菌株，差别具有显著性意义。这说明OprD2表达缺失或减少是本院PA耐亚胺培南的主要机制。
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