摘要
细菌人工染色体(BAC)基因组文库是一种以经过改造的大肠杆菌F因子为载体，以大肠杆菌为宿主，允许有较大外源DNA片段(100 kb-200 kb)插入的，包含某种生物全部基因的随机片段重组DNA克隆群体。由于BAC克隆具有插入片段稳定、嵌合体少、操作容易等优点，基因组BAC文库已经成为构建物理图谱、图位克隆、比较基因组研究、同源基因克隆、基因表达调控研究的一个关键工具。本试验以“鄂柑-1号”椪柑幼嫩叶片为材料，构建椪柑的基因组BAC文库。主要结果如下： 1.得到20736个平均插入片段大小为120kb的克隆，保存在54个384板中，通过简单估计文库覆盖基因组6.51倍。 2.将文库复制了一个拷贝。提取了其中22个克隆的质粒DNA，并用HindⅢ进行酶切后，进行了fingerprinting电泳，初步判断无严重叶绿体DNA污染情况。 3.利用4D-PCR的方法，用八氢番茄红素合酶基因的特异序列作引物，对此椪柑BAC文库的一部分与同实验室博士研究生M.N.R.Baig所构建的红肉脐橙基因组BAC文库的其中一部分进行了筛选，椪柑文库得到一个阳性克隆，红肉脐橙文库得到了三个阳性克隆。
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