摘要
目的： 在毕赤酵母GSll5中表达抗菌肽ABPj-1，检测其抗菌、抗病毒活性。观察ABPj-1对实验动物神经系统、心血管系统和呼吸系统的影响；观察ABPj-1对实验动物的急性毒性、长期毒性和致畸作用。为临床用药提供实验依据。 方法： 人工合成ABPj-1的基因序列并克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K。重组表达质粒pPIC9K-ABPj-1转化至毕赤酵母 GS115中，经G418筛选，诱导阳性克隆菌株表达，鉴定产物并进行热．稳定性试验，攻毒试GS验。检测其抗G菌41抗病毒活性。经口服给药观察其对小鼠的自主活动的影响，以了解其对实验动物神经系统影响；观察ABPj-1对麻醉犬血压、心率、呼吸频率和呼吸幅度等一系列指标，了解其对心血管系统和呼吸系统的影响。应用急性毒性试验、长期毒性试验、全身过敏试验、致突变试验和微核试验研究其毒性作用。 结果： 成功建立了重组质粒pPIC9K-ABP-j1，并在毕赤酵母GS115中成功诱导表达，并经SDS-PAGE鉴定到目的蛋白。经检测，ABP-j1具有较强的热稳定性，并具有较强的抗菌、抗病毒活性。 本实验中，单次经口灌服ABP-j1分别为2.5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg后，小鼠自主活动正常，没有表现兴奋或抑制状态，而且与戊巴比妥钠镇静催眠无明显协同作用。给麻醉犬静脉分别注射2.5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg后，对实验动物的心血管系统和呼吸系统没有明显影响。 小鼠灌胃急性毒性试验中，受试小鼠无一死亡，故没有测出LD50，表明ABP-j1属无毒性药物。全身性过敏试验中，ABP-j1组评分为0，因此ABP-j1没有过敏性。经微核实验和小鼠精子畸变试验检测，试验结果均为阴性，ABP-j1没有致微核作用和致精子畸形作用。对大鼠长期用药，ABP-j1低、中、高剂量组大鼠无一死亡，一般状况良好，血液学各指标、血液生化各指标及重要脏器组织形态均无显著影响，提示ABP-j1长期用药是安全的。
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