摘要
根据致病性及基因组特征，猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)可分为无致病性1型(PCV1)和有致病性2型(PCV2)。其中PCV2是断奶仔猪多系统衰弱综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原体。它还与许多其他猪疾病相关，如猪皮炎与肾病综合征(porcine dermatitis nephropathysyndrome，PDNS)、增生性坏死性肺炎(proliferative necrotizing pneumonia，PNP)、猪呼吸道综合征(porcine respiratory disease complex，PRDC)、繁殖障碍、先天性震颤、肠炎等疾病。这些疾病的广泛流行严重影响养猪业，给许多国家和地区带来巨大的损失。PCV2的感染可以造成免疫抑制，引起其他各种病原的继发感染，造成的间接损失难以估计。PCV2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一。目前，还没有一种特异、敏感、标准化的诊断试剂用于PCV2的定量检测及临床样品的诊断。本研究的目的是进行PCV2特异性单克隆抗体的研制，为建立PCV2TCID50的测定及PCV2的免疫学诊断方法奠定基础。 利用本室研制的嵌合型PCV1-2灭活制剂作为免疫原免疫BABL/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，用PCV1、PCV2病毒及其纯化蛋白作为筛选抗原，分别经间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay，IFA)和间接酶联免疫吸附试验(indirect enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)筛选，共筛选到4株杂交瘤，分别命名为1E8、3F9、5G4、7G6。间接免疫荧光结果显示1E8能与PCV2发生反应，5G4能同时与PCV1和PCV2发生反应，而3F9和7G6无荧光反应性。间接ELISA结果显示，1E8和7G6只与提纯的PCV2蛋白发生反应，而3F9和5G4能同时与提纯的PCV1和PCV2蛋白发生反应。这4株单抗制备的腹水分别经过间接免疫荧光、间接ELISA法、Western-blot、免疫组织化学、病毒-抗体中和试验进行测定和鉴定。间接免疫荧光测得1E8对PCV2的荧光效价可达1∶3200；间接ELISA法测得1E8和7G6对PCV2的效价分别为1∶12800和1∶6400。Western-blot结果显示，这4株单抗同时针对PCV的ORF2反应；免疫组化结果表明，1E8和5G4对组织中的PCV2抗原具有较好的反应性；中和试验结果表明，1E8和5G4对PCV2病毒具有中和效应，中和价分别为1∶267和1∶93。这四株单抗的抗体亚类均为IgG1。 从猪屠宰场收集104份猪腹股沟淋巴结，通过PCR方法和免疫组化法(immunohistochemistry，IHC)检测PCV2的抗原分布情况，以及通过IHC鉴定PCV2特异性单抗与临床样品中PCV2的结合能力。结果表明，PCR方法、IHC法检测猪PCV2阳性率为分别为22.1％和27.9％。但是两种不同检测方法同时检出的PCV2阳性头数只占14.4％。对照病毒分离结果，两种方法与后者的符合率分别为64.7％和79.4％。104份猪腹股沟淋巴结组织病理学变化结果表明，淋巴细胞缺失、组织细胞浸润、淋巴滤泡不明显、嗜中性粒细胞浸润、出现多核巨细胞、嗜酸性粒细胞增多的比例分别为48.0％、36.5％、12.5％、4.8％、1.9％、21.2％。
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