摘要
NF-κB是一种广泛存在于哺乳动物的真核转录因子，能激活至少150种基因的转录表达，从而调控细胞凋亡、细胞粘附、细胞增殖、天然以及适应性免疫应答、炎症、胞内胁迫应答和组织重塑等过程。NF-κB在风湿性关节炎、动脉粥样硬化、多发性硬化和哮喘等炎症以及前列腺癌、神经胶质瘤和淋巴癌等多种癌症中存在持续活化状态。抑制NF-κB信号的活化对这些疾病的治疗有明显作用。因此NF-κB已成为炎症、癌症等疾病治疗中的一个重要靶点。为了便于大规模筛选NF-κB抑制剂，我们建立了以NF-κB为靶点的高通量筛选系统。首先根据现有证据把四个串联重复的NF-κB结合位点序列连于小启动子miniCMV上游，然后插入到了Promega公司的质粒pGL4.20中，最后得到能够对NF-κB激活剂进行响应的荧光素酶报告质粒pGL4.20-κB-miniCMV。通过脂质体转染的方法把该质粒转入人胚肾293T细胞以及人前列腺癌细胞DU145中，然后利用嘌呤霉素(Puromycin)进行筛选，得到了稳定整合该质粒的克隆。经验证，挑选了一个对NF-κB激活剂能很好应答的克隆293T-κB-2和能对NF-κB抑制剂PDTC响应的克隆DU145-κB-5。利用该筛选系统对购于国家新药筛选中心的天然化合物库进行筛选，得到了33种NF-κB抑制效率超过45％的抑制剂。这表明我们成功构建以NF-为靶点的高通量筛选系统并能用于NF-κB抑制剂的筛选。
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