摘要
本试验探索板蓝根生物碱的提取工艺,测定板蓝根生物碱的抗菌及抗病毒活性,荧光定量检测板蓝根生物碱的抗病毒活性。 本试验采用醇提法从板监根中提取板蓝根水溶性生物碱和脂溶性生物碱,采用倍比稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC),测定其对猪肾细胞(PK-15细胞)的最大无毒浓度(TC0)、半数中毒浓度(TC50),应用MTT法先加药物后接病毒、先接病毒后加药物、病毒和药物同时加入、病毒和药物体外作用2h后再加入四种方式测定了生物碱的体外抗PPV效果,用荧光定量PCR检测板蓝根生物碱抗猪细小病毒的效果。 板蓝根生物碱的提取结果表明:板蓝根药物中水溶性生物碱的提取率为0.044％,板蓝根脂溶性生物碱的提取率为0.50％。 体外抑菌试验结果表明:板蓝根水溶性生物碱对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌、绿脓杆菌的最小抑菌浓度分别是175、175、87.5、350、43.75mg/ml,对鸡源大肠杆菌没有测到最小抑菌浓度；对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌、绿脓杆菌的抑菌圈分别是8、7、10、6.3、8.3mm,对鸡源大肠杆菌没有测到抑菌圈。板蓝根脂溶性生物碱对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌、绿脓杆菌的最小抑菌浓度分别是50、25、25、100、100mg/ml,对鸡源大肠杆菌没有测到最小抑菌浓度；对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌、绿脓杆菌的抑菌圈分别是10.3、16、12.3、11.3、11mm,鸡源大肠杆菌没有测到抑菌圈。 体外抗病毒试验结果表明:板蓝根水溶性生物碱TCo、TC50分别为1mg/ml、0.95mg/ml,脂溶性生物碱的TCo、TC50分别为0.5mg/ml、0.105mg/ml；两种生物碱均有一定的抗PPV作用,其中水溶性生物碱以先加药物后加病毒的方式抗病毒效果较好。脂溶性生物碱以先接种病毒后加药及病毒和药物体外作用2h后再同时加入的方式抗病毒效果较好,且与其浓度呈正相关。 本实验建立了SYBR Green Green I荧光定量检测板蓝根混合生物碱体外抗猪细小病毒作用,结果显示板蓝根混合生物碱具有抗猪细小病毒作用,在混合生物碱作用下,PPV在培养细胞上清液中的含量随着时间增加,在60h达到最高峰,为7.35E+05之后开始下降:PPV在细胞中的含量随着时间增加,在72h达到最高峰1.24+05,为之后开始下降。 板蓝根生物碱具有显著的体外抑菌活性,具有抗病毒作用,并与其给药方式有很大的关系。
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