摘要
目的：1.观察体外低氧低糖培养海马神经元的活力、BACE1和Aβ的变化，探讨血管性痴呆可能的发病机制。2.观察金钗石斛生物总碱对体外低氧低糖培养海马神经元的活力、BACE1和Aβ的影响，探讨金钗石斛生物总碱治疗血管性痴呆可能的机制。 方法：取新生SD大鼠海马神经元原代培养，并行nissel染色和特异性免疫荧光染色鉴定；在培养至第八天时，将培养神经元分为：正常对照组、溶媒对照组、DNLA对照组、低氧低糖组、DNLA干预组。正常对照组进行正常培养，溶媒对照组在正常对照组的基础上加入溶媒培养，低氧低糖组在低氧低糖状态下进行培养，DNLA对照组加入高剂量DNLA进行正常培养，DNLA干预组在低氧低糖组的基础上加入DNLA培养，分为DNLA低剂量组（DNLA浓度0.00025ng/ml）、DNLA中剂量组（DNLA浓度0.0025ng/ml）和DNLA高剂量组（DNLA浓度0.025ng/ml）。观察时间点为12h、24h、36h。采用MTT法检测海马神经元活力，放射免疫法检测培养液中Aβ含量，EIASA法测定细胞BACE1蛋白含量。 结果：1、海马神经元活力：正常对照组和溶媒对照组各组间细胞活力无显著差异，（P>0.05）；与正常对照组和溶媒对照组比较，低氧低糖组各时间点海马神经元活力显著降低，显著有差异性（P<0.01）。与低氧低糖组比较，DNLA干预组各时间点海马神经元活力均明显提高，差异有显著性（P<0.01）。2.BACE1和Aβ放免测定结果：与正常对照组和溶媒对照组比较，低氧低糖12h、24h、36h组BACE1和Aβ含量显著升高，差异有显著性（P<0.01）；低氧低糖12h、24h、36h组组内比较，BACE1和Aβ浓度随时间增加持续显著升高，具有显著性差异（P<0.05）。与各对应时间点低氧低糖组比较，DNLA干预组Aβ含量显著降低（P<0.01）。 结论：1、低氧低糖培养可显著损害海马神经元，提高海马神经元BACE1及Aβ的含量。2、DNLA可以减轻低氧低糖培养的海马神经元的损害，降低低氧低糖培养的海马神经元BACE1和Aβ的含量。
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