摘要
本研究以中国水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)和转ACS反义基因的中国水仙试管小鳞茎为试验材料，进行如下研究：①叶片ACS基因同源克隆；②愈伤组织培养条件的优化；③初代转基因试管苗小鳞茎继代增殖和移栽。主要研究结果如下： 1、中国水仙叶片ACS基因的克隆 采用申能博彩RNA试剂盒与TRIZOL试剂相结合的方法提取的总RNA，其完整性比较好、纯度高、量也较大，能够较好的去除多糖多酚，是提取中国水仙叶片总RNA行之有效的方法。应用同源克隆结合RACE技术，获得中国水仙叶片ACS的cDNA片段1427bp，包含3’端17个poly(A)尾。该序列与登入GenBank的其他植物ACS基因有较高的同源性，序列分析发现该片段包含一个最大为1200bp的阅读框，编码400个氨基酸，TAA为终止密码子，已在GenBank上登录，登录号为GU182503。 2、中国水仙愈伤组织培养条件的优化研究 本试验以中国水仙鳞茎为供试材料，以鳞茎盘切块为外植体诱导愈伤组织，对中国水仙愈伤组织的培养进行研究，优化其继代增殖条件。在暗培养的条件下，采用对称分布的方式接种在附加2,4-D1.0mg/L、KT0.1 mg/L、BA0.5mg/L、30g/L蔗糖的MS培养基上，最有利于中国水仙愈伤组织的培养。 3、初代转基因试管苗的继代增殖和移栽 研究结果表明：初代转基因试管苗小鳞茎在附加6-BA2.0mg/L、2,4-D0.1mg/L和蔗糖30g的MS培养基上培养，增殖率最高；1/2MS培养基附加NAA0.5g/L和0.5g/L活性炭最有利于转ACS反义基因中国水仙试管苗小鳞茎的壮苗生根；经预处理及选择经二次高压处理后的基质田园土：泥炭土=1:1为基质进行移栽能达到本试验研究的最好效果。
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