摘要
目的：对两个来自我国黑龙江省的常染色体显性遗传性角膜营养不良家系进行致病基因的定位以及候选基因突变的检测，探讨角膜营养不良发病的分子遗传学基础。 方法：收集家系资料，绘制系谱图，对所有家系成员进行系统的眼科检查并详细记录病史。采集家系成员的外周静脉血，提取基因组DNA。在热点区域内选取微卫星标记进行基因扫描，利用LINKAGE软件包进行连锁分析，利用CYRILLIC软件进行单体型分析，确定候选基因所在的染色体区域。候选基因直接进行正反双向测序检测基因突变。利用SEQUENCE ANALYSIS软件对定为区域内候选基因的编码区、启动子区的测序结果进行分析。 结果：两个家系分别确诊为Avellino角膜营养不良(ACD)和格子状角膜营养不良(LCD)。ACD家系两点间连锁分析在D5S396和D5S393这两个微卫星标记处获得最大优势对数计分(LOD)值，Zmax=3.01(0=0.00)。单体型分析将致病基因定位于微卫星标记D5S808和D5S638之间，遗传距离约为11.2cM。这个区域内有与角膜营养不良相关的候选基因TGFBI。候选基因直接测序，TGFBI基因第4外显子存在一个G→A的点突变，导致编码第124个精氨酸的遗传密码子突变为组氨酸(CGC→CAC)，即R124H突变。此突变与该家系共分离，即家系中的正常人和100名正常对照未发现此突变，排除了多态性的可能。LCD家系两点间连锁分析在D5S399微卫星标记处获得最大优势对数计分(LOD)值，Zmax=2.44<0=0.00)。单体型分析将致病基因定位于微卫星标记D5S396种D5S414之间，遗传距离约为2.5cM。这个区域内有与角膜营养不良相关的候选基因TGFBI。候选基因直接测序，测序结果显示TGFBI基因第12外显子存在一个C→A的点突变，导致编码第546个丙氨酸的遗传密码子突变为天冬氨酸(GCC→GAC)，即A546D突变。此突变与该家系共分离，即家系中的正常人和100名正常对照未发现此突变，排除了多态性的可能。 结论：本研究将两个来自我国黑龙江省的角膜营养不良家系的致病基因定位于5号染色体上的TGFBI基因，并分别检测出R124H和A546D两种突变类型，这两种错意突变分别与这两个家系共分离。此研究结果充实了角膜营养不良的突变谱，为更为精确的基因诊断提供了理论依据；进一步证实了TGFBI基因在该遗传性眼病的发病机制中的重要作用，为下一步研究突变蛋白特性及角膜营养不良的发病机制打下基础。
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