摘要
目的 缺血性脑血管病,属于中医“中风”的范畴,是目前严重危害人类健康的三大疾病之一,具有高发病率、高死亡率和高致残率等特点。现代医学研究证实,缺血性脑血管病发生后,会产生一系列复杂的级联反应,即兴奋性氨基酸毒性作用、氧自由基损伤、炎症、细胞凋亡等,导致神经细胞的损伤。BDNF、NGF能修复受损神经元,维持神经元的正常功能。因此脑缺血再灌注后增加脑组织BDNF及NGF的表达可以使该区神经功能恢复,促进临床康复。 补阳还五汤是治疗缺血性中风的经典方剂,由清代名医王清任所创制,始载于《医林改错》,主要用于中风恢复期的治疗。近年来的药理研究表明,丹参、三七、葛根、知母、元胡等药物在急性脑缺血发生后可降低兴奋性氨基酸毒性、抑制细胞凋亡、自由基的产生及抗脂质过氧化等作用,符合现代医学对缺血性脑损伤发病机制的阐述。在补阳还五汤基础之上加入丹参等上述五味中药,共奏益气活血、通经活络之功,可提高中风急性期的治疗效果。 因此,本研究通过应用加味补阳还五汤观察局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织BDNF、NGF表达的变化,来阐明其对缺血性脑损伤的神经元保护作用,从而为临床实践进一步提供实验依据。 材料与方法 1、动物模型制备 清洁级健康雄性SD大鼠70只,随机分为假手术组、模型组及治疗组,模型组及治疗组又各分为缺血12小时、24小时和48小时3个亚组,每组动物10只。采用线栓法栓塞大鼠左侧大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组除不栓线外,其余操作同其他两组。 2、脑组织切片 在模型制备成功后的各个时间点将大鼠断头处死,取视交叉前后约2-5mm脑组织置于4℃4％多聚甲醛磷酸缓冲液中固定24小时,然后常规脱水、浸蜡、包埋,并制成7微米厚冠状切片,放在载玻片上,置60℃温箱中2小时。 3、免疫组化检测 对留取的脑组织采用SABC法行免疫组化检测,光学显微镜下观察BDNF及NGF免疫阳性细胞,应用图像分析软件统计阳性细胞个数。 4、数据处理 结果用均数±标准差表示,并采用t检验的方法进行组间比较,P<0.05为差异具有显著性。 实验结果 模型组及治疗组大鼠脑组织BDNF、NGF的表达在脑缺血再灌注后12小时、24小时以及48小时均强于假手术组(P<0.01)。与模型组相比较,治疗组大鼠脑组织BDNF的表达在缺血再灌注后各时间点均增强(P<0.01),NGF的表达亦增强(P<0.05),以缺血再灌注后48小时表达增强最为显著,统计学上具有显著性差异。 结论 局灶性脑缺血再灌注大鼠在应用加味补阳还五汤后脑组织BDNF和NGF的表达增强,发挥其对抗脑缺血的保护作用。
NETL