摘要
一、研究背景: 特发室性早搏(Idiopathic premature ventricular contractions,IPVCs)是临床上最常见心律失常之一,是指不伴有器质性心脏病证据的室性早搏,发病机制尚未完全明确。既往认为是“良性”病变,但目前发现极少部分预后差,可致病理或器质性心脏改变,严重者易触发致命性室性心律失常而猝死。临床药物治疗效果不理想,易反复发作,造成患者心理、精神上的沉重负担,降低生活质量。近年来射频消融(Radiofrequency ablation,RFCA)技术的发展,多数频发的 IPVCs 可以根治,但其适应症存在争议,仅限于频发、症状明显且药物效果不好的患者。上述问题可归结于对其发病机制认识不深。随着分子遗传学的发展,心律失常的分子机制可深入阐明,探讨群体间致病基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)已成可能,且有望依据基因型指导临床的防治举措。心电活动受自主神经系统紧密调节,β1 肾上腺素能受体(β1adrenergic receptor,β1-AR)是心脏的主要 β-AR,在介导心脏交感神经-肾上腺系统信号转导中发挥着重要的作用。β1-AR 基因有两个最重要的 SNP:核苷酸145A→G 和 1165C→G,相应的氨基酸置换分别为 49 位 Ser→Gly,389 位 Arg→Gly。其中 Arg389Gly(C389G)SNP 位于细胞内胞浆尾端近第七跨膜区,此处被认为是受体与 Gs 蛋白偶联的重要区域。体外突变研究表明 Arg389 受体与Gly389受体相比具有更高的基础腺苷酸环化酶活性和异丙肾上腺素激动的腺苷酸环化酶活性,提示β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 在 IPVCs 的发生与发展过程中可能具有重要的生物学意义。目前国外有研究表明 β1-AR 基因 C389G 位点SNP 与特发室性心律失常的发病相关,且该基因分布存在种族差异,国内尚未见相关报道。本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerasechain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术进行病例对照研究,旨在探讨国人 β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 与频发的 IPVCs 发生发展中的关系,期望在分子基因学水平阐明 IPVCs 发生发展的可能机制或特点,为临床防治提供基础依据。 二、研究目的: 以华南地区汉族人群 144 例频发的IPVCs患者和142例健康对照者为研究对象,建立临床资料,检测血浆肾素活性(Plasma renin activity,PRA)及窦性心率震荡(Heart rate turbulence,HRT)的指标震荡初始(turbulence onset,TO)、震荡斜率(turbulence slope,TS)值水平,对交感神经系统通路中可能涉及频发的 IPVCs 发病的 β1-AR 基因 C389G 位点检测,了解该位点 SNP 与华南地区频发的 IPVCs 人群的关联情况；探讨 PRA 及 HRT 各指标与 β1-AR 基因 C389G位点 SNP 的关系；并进一步对频发的IPVCs患者进行 RFCA 治疗,比较治疗前后 PRA 及 HRT 各指标变化与 β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 的关系。从而在自主神经调节的角度探索 β1-AR 基因在华南汉族人群频发性IPVCs发生发展中的可能作用。 三、研究对象: 研究对象均来自2007年9月～2009年8月南方医院心内科因频发IPVCs住院病人及健康体检人员。IPVCs组入选标准:①24h动态心电图检查总室早数目大于720／24h且能进行HRT分析(有任-室早的前2次、后15次心律为窦性心律)者；②体检、胸片、心脏彩超等检查均未发现器质性心脏病；③无其他重要脏器疾患、电解质紊乱及其他可致室性早搏的因素。排除标准:①非窦性心律患者,如房颤、房扑、临时和永久起搏器植入者等；②病态窦房结综合征、房室传导阻滞者:③ 1 周内服用抗心律失常药物及影响自主神经药物者。对照组入选标准:健康体检人员:①24h动态心电图检查早搏数小于100／24h者,并同时符合室早组的②、③及上述排除标准的患者。所有研究对象均为华南地区汉族人群(无血缘关系),且已获知情同意。 根据以上标准,共入选频发特发室早患者 144 例,年龄平均(42.98±10.03)岁,其中男性56例,女性88例,24h室早数(12671±8464)次,室早负荷(24h室早数占总心率的百分比:11.63±7.82)；入选健康对照组142例,年龄平均(42.01±8.96)岁,其中男性51例,女性91例,24h室早数(44±29)次,室早负荷(0.04±0.03)。 四、研究方法: 两组均建立临床资料观察表,详细记录研究对象的姓名、性别、年龄、身高、体重、血压、吸烟史、饮酒史等一般情况；测定血清生化指标:胆固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三脂(Triglyceride,TG)、血糖、血钠、血钾、血浆肾素活性(PRA)；均进行24h动态心电图检查:记录24h室早总数、平均心率、室早负荷(24h 室早总数占总心率的百分比),并进行HRT初始值(TO)、震荡斜率(TS)的分析计算。用试剂盒提取研究对象静脉血白细胞基因组 DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法鉴定 β1-AR 基因C389G 位点的多态性(SNP)。对室早负荷≥10.0的症状性频发室早患者进行射频消融治疗,术后1月检测血 PRA 并作24h动态心电图检查进行HRT分析。 比较两组之间不同基因型、等位基因频率的分布及临床资料、各血生化指标、PRA 等的差异。比较不同基因型心率震荡 TO、TS 值及 HRT 异常率的差异。比较不同基因型频发室早患者射频消融前后的 PRA、TO、TS 值的变化,分析β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 与 RFCA 疗效的关系。HRT 异常定义:TO 值≥0％和(或)TS≤2.5ms／RR。 五、统计分析: 用SPSS13.0统计软件分析。计量资料符合正态分布的以均数±标准差表示,计数资料以频数表示。遗传平衡检验采用 Hardy-Weinberg 平衡定律。计数资料组间比较采用x2检验。正态分布计量资料的组间比较经方差齐性检验,多样本均数比较方差齐性者采用one-way ANOVA,同一样本均数前后比较采用协方差分析,组间多重比较采用LSD法；两样本间均数比较方差齐者采用独立样本的t检验,方差不齐者采用t’检验。用单变量logistic 回归分析探讨基因多态性与室早发生的关系,计算优势比(odds ratio,OR)及95％可信区间(95％confidenceinterval,95％ CI)。检验水准α=0.05。 六、结论: 1.β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 存在于华南地区汉族人群中,其分布频率在特发室早及健康人群之间不同。 2.β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 与华南地区汉族人群特发室早的发生有相关性,C 等位基因是室早的易患基因,G 等位基因是室早发生的保护基因。 3.β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 与 HRT 的异常有相关性,其与 HRT 异常率的关系为:GG<CG<CC。 4.β1-AR 基因 C389G 位点 SNP 影响特发室早发生的可能机制:C 等位基因导致高交感神经兴奋性及自主神经功能异常,进而增加特发室早的发病风险。 5.射频消融治疗对各基因型频发室早自主神经改善的效果关系:GG<CG<CC。HRT 指标可能是评价特发室早射频消融治疗疗效的新指标。
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