摘要
本研究对仙客来和地被菊两种观赏植物进行花药培养。对影响仙客来花药胚状体诱导和地被菊愈伤组织诱导的各个因素进行了探讨；并对小孢子的发育过程进行了形态学观察；最后对所得的地被菊植株进行了ISSR分析。 具体研究内容及结果如下： 1.花蕾的大小、颜色基本可以作为判断小孢子发育时期的一个简便而可靠的指标。当小孢子处于单核靠边期时，仙客来的花瓣超出花萼2mm～6mm且花瓣为白色或粉红色；地被菊花蕾直径0.5cm ～ 0.8cm，花蕾圆心处的萼片尚未分开且透明，并且可观察到外围小花颜色为浅黄色时为单核期。 2.最适合仙客来外植体灭菌方法是：用自来水冲洗，在多菌灵固体制剂配成的0.2%溶液中浸泡30min，转入超净工作台用无菌水冲洗两遍。然后用70%酒精浸泡30s，无菌水冲洗1min，再用1.5% NaClO浸泡20min，无菌水冲洗3遍，每次1min。 3.不同基因型花药培养有显著的差异。仙客来五个品种中，‘哈里奥2010'、‘哈里奥2160'胚状体诱导率最高；地被菊的7个品种中，‘北林红'愈伤组织诱导率最高，其植株再生率也是最高的。 4.对两种植物的花药进行温度处理。结果表明，仙客来‘哈里奥2010'低温预处理48h后，胚状体诱导率为17.8%，明显高于其他预处理。对于地被菊而言因品种不同对于温度处理的愈伤组织诱导率反应也不同，但经过72h 4℃低温预处理后植株再生率是最高的。 5.植物生长调节剂在两种植物的花药培养中起着重要的作用。结果表明，仙客来中不同品种间胚状体诱导率有一定的差异。‘哈里奥2010'在0.02 mg/L NAA＋1.0 mg/L 6-BA上的胚状体诱导率最高，而‘哈里奥2160'的胚状体诱导率在0.1mg/L NAA＋1.0 mg/L 6-BA上最高；地被菊花药愈伤组织诱导率最高的植物生长调节剂浓度组合是MS+6-BA1.0mg/l+2,4-D1.0mg/l，但植株再生率最高的则是添加MS+1.0mg/l NAA＋1.5mg/l 6-BA的培养基。 6.蔗糖浓度对仙客来花药培养的影响明显，结果显示，仙客来胚状体诱导率在添加90 g/L蔗糖的培养基上达11.2%，是添加60 g/L和120 g/L蔗糖时的2倍多。 7.活性炭对地被菊愈伤组织的诱导率没有影响。在培养基中加入0.2%的活性炭，诱导率已经下降为0。由此可见，活性炭对地被菊小孢子胚胎发生产生了副作用，同时对其植株再生也有相同的影响。 8.对接种后的花药进行形态观察，显示小孢子发育的不同时期的变化。仙客来在接种20天时小孢子分裂成四个核,30天以后已开始形成花粉壁,35天以后突破原花粉壁形成细胞团。地被菊在接种14天时开始分裂成细胞团，形成愈伤组织。 9.最后本研究对获得的地被菊花药培养的再生植株作了ISSR分析。结果显示多数再生植株与母本有差异条带。
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