摘要
以自行培养的蓝隐藻（Chroomonas placoidea）为材料，经过压力破碎和高速离心分离去除膜成分，得到的上清液分别采用70%、80%、90%和100%的硫酸铵分级沉淀藻蓝蛋白（PC），经两次分子筛层析纯化，PC的A646/A280>7，经中性PAGE和HPLC检测其纯度，发现不含杂蛋白。通过研究PC及其亚基在不同pH条件和尿素变性剂中的稳定性，摸索亚基变性条件，采用SephacrylS-100柱层析分离得到了富含b亚基的蓝色SG组分和富含a亚基的绿色SG组分。同时结合尿素-SPS-PAGE、二维电泳、聚酰胺薄膜层析等技术，对各级PC沉淀以及分离后的亚基组分的吸收光谱、荧光谱、亚基组成、亚基等电点以及亚基N-末端氨基酸组成等进行了测定和分析。 实验结果显示，纯化的蓝隐藻PC至少含有4种发光亚基，分别命名为β1（20.3kDa），β2（16.7kDa），a1（9kDa）和a2（8.3kDa），其中微酸性的β2发光亚基是文献中没有报道的。Β1和β2亚基的等电点处于6.0和5.7附近的微酸性区；α2亚基等电点在7.1附近；而α1亚基则是一个等电点为9.1的碱性亚基。因此这些亚基可借助静电力彼此结合，在水溶液中形成分子量大小不等、亚基比例不尽相同的PC复合物形式；此外二维电泳及N-末端结果提示蓝隐藻PC中可能还结合有一些低丰度的无荧光蛋白，可能在PC的亚基组装和复合物形成中担负一定的作用。
NETL