摘要
WBZ作为一味传统中药，由于其主要成分为鞣质类成分，因此，古方中大多是对其收敛功效的应用，但也有其对消渴症治疗的古文献记载，如《金匮要略》、《世医得效方》中均记载以WBZ研末服用，能治消渴饮水。可见，WBZ对糖尿病的治疗作用早已有理论依据。糖尿病为慢性病，需长期服药，而WBZ中含有大量的鞣质成分，如长时间直接服用，大量鞣酸进入体内后被分解为倍酸和焦倍酸，可引起灶性肝细胞坏死，因而限制了WBZ在对糖尿病方面的应用，寻找WBZ治疗糖尿病的降糖有效成分并进行分析具有重要的基础意义。已有现代基础研究文献证明WBZ脂肪油确具有降血糖的药理作用，并通过对其成分分析发现，WBZ油主要为含有月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸等的脂肪油。根据中国药典2005年版，WBZ按照形态可分为“DB”和“JB”，均由BK（WBZBK）和YC（WBZYC）组成，本文作者通过预试验发现，脂肪油主要为YC所含有，而BK在WBZ中所占重量大，耗费溶剂多，其所含有的脂肪油却很少，因此，本课题主要通过动物实验和仪器分析相结合的方法，着重研究WBZYC脂肪油的降血糖有效部位及效果并分析其成分组成。 本研究首先对其制备工艺进行了研究，最终确定WBZYC油的提取工艺为以石油醚（60～90 ℃）为溶剂，加热回流2次，每次2小时，每次6倍量溶剂，回收溶剂，取出，称重，趁热加入占油总重量 0.5%的柠檬酸，80 ℃保温30分钟，再加入85 ℃左右的热蒸馏水洗涤2次，每次用水量为油总重量的20%，去掉水液，油层于100 ℃左右真空脱水2小时，即得。并经过验证工艺检验所确定的工艺合理可行。其次，进行了WBZYC油的理化分析研究，通过查阅中国药典以及参考其它文献，对WBZYC油中的全脂肪酸、游离脂肪酸、不皂化物、单酯及复酯等定量测定。完成了WBZYC油的质量控制研究，包括对WBZYC油的外观形状到理化常数等进行控制研究，建立了专属性强的鉴别方法以及对其所含有的5种主要脂肪酸进行含量测定，以此可有效控制WBZYC油的质量。确定WBZYC油中5种脂肪酸的含量测定主要采用国内外比较常用的先碱炼再甲酯化的方法，即先采用碱水解脂肪油得脂肪酸钠，再甲酯化后，以毛细管柱气相色谱法测定各脂肪酸甲酯含量。通过对其方法学的考察，最终确定样品制备方法为在脂肪油中加0.5 mol·L-1KOH甲醇溶液2 ml，60 ℃水浴10 min，待油珠溶散，取出，放冷，再加2 ml三氟化硼乙醚—甲醇溶液，60 ℃水浴中酯化5 min，再取出，放冷。精密加入正己烷2 ml，振摇再加入2 ml饱和氯化钠溶液，摇匀。待分层后，精密吸取上层液适量，测定，即可。所确定色谱条件如下：色谱柱为Agilent HP-1石英毛细管柱（30 m×0.53 mm，1.5 μm），柱温为200 ℃，进样口、检测器温度均为220 ℃，载气为氮气，流速：2 ml·min-1。实验结果证明此研究精密度高，重复性好，可用于WBZYC油的质量控制。对WBZYC油的药效学研究，主要通过查阅大量的文献并结合预试验结果，最终确定本部分造模选择ICR小鼠为实验动物，以链脲佐菌素腹腔注射方式给药，给药剂量为150 mg·kg-1，造模6天后，测定实验小鼠空腹3小时后血糖，选取血糖值大于10 mmol·L-1的小鼠，随机分为3组，每组至少10只，除模型组外，其余两组分别给予DBYC油与JBYC油，1% CMC稀释后灌胃给药，给药剂量为60 mg·kg-1，并分别于给WBZYC油后的第7天和第14天后测定空腹血糖，结果发现，DBYC油与JBYC油降血糖效果相近，分别为30%和28%。可见，其降血糖效果较好。综上所述，采用化学实验和动物实验相结合的方法，确定的WBZYC油的制备工艺稳定、可行，且实验结果表明WBZYC油同样具有一定的降血糖作用，因此，为开发WBZYC油的降血糖制剂研究提供了实验基础。
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