摘要
目的：蛋白激酶Cgamma（PKCγ）是参与吗啡耐受的重要细胞内信号分子，它能激活NMDA 受体和使mu 受体脱敏。本实验观察大鼠鞘内注射PKCγ短发夹干扰RNA 慢病毒对PKCγ和NMDA 受体基因表达及对急性和慢性吗啡耐受的影响，从而探索吗啡耐受基因治疗的新策略。 方法：包装和浓缩PKCγ短发夹RNA干扰序列的慢病毒，并用293T细胞转染法测定慢病毒滴度。250-300g 雄性Sprague-Dowley 大鼠鞘内置管。12只大鼠随机分为盐水对照组和实验组，分别鞘内注射盐水10ul和PKCγ RNA 干扰慢病毒10ul，一周后观察不同剂量吗啡皮下注射对大鼠甩尾潜伏期（TFL）的变化，计算出最大可能效应（%MPE），评价两组吗啡镇痛效应。分别构建急性和吗啡耐受模型，通过测量大鼠TFL，计算%MPE 评价PKCγ沉默对大鼠吗啡耐受的影响。通过免疫组织化学方法检测慢性吗啡耐受大鼠脊髓PKCγ和NMDA 受体表达变化。 结果：成功包装和浓缩慢病毒，测定滴度为1.25×109/ml。在吗啡镇痛效应实验中实验组比盐水对照组%MPE 差异有统计学意义（p＜0.05），实验组吗啡镇痛效应增强。大鼠急性和慢性吗啡耐受模型构建稳定：在急性吗啡耐受模型中，PKCγ沉默大鼠%MPE明显增加（p＜0.05）；在慢性吗啡耐受模型中，PKCγ沉默大鼠%MPE 明显增加（p＜0.05）。免疫组织化学显色发现慢性吗啡耐大鼠脊髓PKCγ和NMDAR1受体灰度值增加（p＜0.05），而PKCγ沉默大鼠脊髓PKCγ和NMDAR1 受体灰度值减少（p＜0.05）。 结论：鞘内注射PKCγ小发夹干扰RNA 慢病毒能增强吗啡镇痛效应并能减轻急性和慢性吗啡耐受。
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