摘要
Apoptin/VP3（凋亡素）是来源于鸡贫血病毒的一种小分子蛋白，通过线粒体途径特异性诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无毒副作用，但其作用机制尚未完全阐明。 目前，相继发现了多种与Apoptin 相互作用的蛋白质，如：death effector domainassociated factor (DEDAF)，anaphase promoting complex/cyclosome subunit 1(APC/C)，N-myc interacting protein (NMI)，Acid ceramidase，SUMO，promyelocytic leukemia protein (PML)，Ppil3，CRM1，imprtin-β1等，据文献报道，这些蛋白质均与Apoptin 特异性诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。2009年，Maddika等报道，CDK2是磷酸化修饰Apoptin 108T的激活酶，Apoptin与PI3K的p85亚基相互作用别构激活PI3K，PI3K 活化后使Akt 激活，Akt与Apoptin 共定位于核内，进一步激活CDK2，CDK2 活化后磷酸化修饰Apoptin。因此，分析研究这些与Apoptin 相互作用的蛋白质，对阐明Apoptin的诱导肿瘤特异性凋亡机制具有重要意义。 酵母双杂交系统是目前研究蛋白之间相互作用的主流方式之一。前期荷兰莱顿大学某课题组以Apoptin 为诱饵蛋白，通过酵母双杂交系统钓取到Apoptin 相互作用蛋白十种，AIP1、AIP2、AIP3、AIP4、AIP5、AIP6、AIP7、AIP8、AIP9与AIP10，其中AIP3 即为FAM96B。 FAM96B，96 序列相似的家庭成员B，亦称为CGI-128[17-20]，位于染色质16q22.1-q22.3，据推测分子量大概在20kD，其功能尚未阐明。2010年 Shinsuke Ito.等报道FAM96B与有丝分裂染色体分离和不规则形状细胞核的堆积密切相关，可能导致XP-D（着色性干皮病）和 XP-D/CS等家族遗传疾病较高的发病率。另外，荷兰莱顿大学这个课题组已经通过免疫共沉淀方法从胞内证实了FAM96B与Apoptin 相互作用。他们进一步研究发现：在肿瘤细胞中 FAM96B分布于细胞质，过表达FAM96B 通过与Apoptin的相互作用可致部分Apoptin 滞留于细胞质中；过表达FAM96B的显著降低Apoptin 诱导HepG2细胞凋亡率，从而抑制Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡的效应；FAM96B在乳腺癌组织中mRNA的表达水平显著低于正常组织。FAM96B 有可能是一种新的抑癌基因。 本研究通过荧光实时定量RT-PCR方法检测FAM96B在肿瘤细胞以及肿瘤组织中mRNA的表达水平，发现FAM96B在HepG2细胞中mRNA的表达水平显著低于L02细胞；FAM96B在肺癌组织中mRNA的表达水平显著低于正常组织；FAM96B在肝癌组织中mRNA的表达水平显著低于正常组织。进一步研究，HepG2细胞内过表达FAM96B，分别用AnnexinV-FITC/PI 双染法检测HepG2细胞凋亡率及MTT 法检测HepG2细胞存活率，结果发现：过表达FAM96B 促进HepG2细胞凋亡；过表达FAM96B 抑制HepG2细胞增殖。以上结果均显示FAM96B有可能是一种新的抑癌基因。 到目前为止，关于Apoptin 特异性诱导肿瘤细胞凋亡的机制尚不十分清楚。对FAM96B的深入研究不仅能够进一步了解Apoptin的作用机制，也可能为肿瘤发生、发展的分子机制提供新的线索。
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