摘要
本试验以青花菜和花椰菜的花、根为材料,应用RT-PCR及RACE技术,克隆出Fe-SOD和Tub基因的全长及CAT基因的片段,为进一步从分子水平探讨抗氧化酶的抗氧化和抗逆机理,揭示微管蛋白的生理功能,为今后青花菜和花椰菜的抗逆育种奠定理论基础。 1.获得花椰菜Fe-SOD基因cDNA全长 以花椰菜根为材料,提取RNA,利用RT-PCR及RACE技术,克隆获得Fe-SOD基因(登录号为JF720320)cDNA全长,包含971bp,编码212个氨基酸,分子量为23902.0,等电点(PI)5.97。 经Blast软件比对,结果表明,该序列与芜菁(Brassica rapa)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)的同源性均在85％以上。编码的氨基酸比对显示,与芜菁(Brassica rapa)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、茄子(Eggplant)、木榄(Bruguieragymnorhiza)、百脉根(Lotus japonicus)的同源性均在90％以上。 2.获得花椰菜CAT基因cDNA片段 花椰菜根部克隆得到长度为1207bp的CAT基因片段,GeneBank登录号为JF720325,该片段与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、芥菜(Brassica juncea)、甘蓝(Brassica oleracea)、辣椒(Capsicum annuum)、桃(Prunus persica)cDNA的同源性较高,分别为87％、82％、81％、81％、79％,而且序列编码340个氨基酸。 3.获得花椰菜Tub基因cDNA全长 花椰菜花为材料,获得Tub基因cDNA全长分别为1631bp(登录号为JF720321),开放阅读框能够编码446个氨基酸,分子量为50286.5,等电点4.81。 Blast软件比对,结果表明,花椰菜花Tub基因cDNA全长与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、杨毛果(Populus trichocarpa)、玉米(Zea mays)、陆地棉(Gossypium hirsutum)的同源性分别为88％、83％、82％、80％。编码的氨基酸比对显示,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、大W(glycine max)、狗尾草(setaria viridis)、陆地棉(Gossypium hirsutum)、玉米(Zea mays)的同源性均在90％以上。 从花椰菜根中克隆得到一条全长1640bp的序列,GeneBank登录号为JF720322,分子量为23520.6,等电点5.01,序列编码212个氨基酸。与花椰菜花中获得的Tub基因cDNA全长比对证明两者是基本相同的,属同一基因,相似性在95％以上。 4.青花菜Tub基因cDNA片段 在青花菜花中克隆得到的Tub基因cDNA片段长度分别为970bp,与其它植物比对发现,青花菜的花与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、燕麦(Oat)、大豆(glycine max)、玉米(Zea mays)、水稻(Rice)、蓖麻(Ricinus communis)、小麦(Triticum aestivum)的同源性均在82％以上,同源性较高。GeneBank登录号为JF720323,该序列编码253个氨基酸。 从青花菜根中获得Tub基因cDNA的保守序列,GeneBank登录号为JF720324,序列编码202个氨基酸。与花椰菜,青花菜花中得到的保守比对显示差异性较大。
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