摘要
胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)是指外周靶组织对胰岛素的敏感性和反应性降低，导致生理剂量的胰岛素产生低于正常的生理效应，长期IR和高胰岛素血症会引发一系列病理状态，如肥胖、尤其是内脏肥胖、糖调节受损、T2DM、脂肪肝、高血压、冠心病、脂质代谢紊乱等。IR是葡萄糖耐量受损和T2DM的主要特征，而胰岛素受体信号转导缺陷是IR发生的主要原因。在体内，胰岛素主要通过IRS-1/PI3-K/PKB(Akt)信号途径促进葡萄糖转运。蛋白激酶B(Protein Kinase B，PKB/Akt)位于磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3-K)的下游，是P13-K受体蛋白激酶的主要靶点，PKB被PI3-K激活后发生磷酸化，激活的PKB可促进葡萄糖转运因子-4(Glucose transport factor-4，Glut-4)的转位和刺激葡萄糖的摄取，调节胰岛素代谢反应，如调节糖原合成、糖酵解等[1]。 蛋白激酶C(Protein Kinase C，PKC)是细胞内信号转导通路上的一个重要成员，它的表达及激活与IR和糖尿病的发生发展密切相关。体内脂质增加可通过PKC影响胰岛素信号转导通路，然而具体的作用机理还不是十分清楚。骨骼肌是胰岛素刺激的葡萄糖摄取的主要靶组织，也是IR发生的主要部位。本研究从胰岛素信号转导途径出发，探讨棕榈酸诱导骨骼肌细胞产生IR的分子机制及PKC在棕榈酸诱导骨骼肌细胞IR中的作用。 材料与方法: 出生3-5天SD大鼠的骨骼肌细胞DMEM培养基优级胎牛血清胰蛋白酶棕榈酸(Palmitic Acid，PA)罗格列酮生物合成人胰岛素（诺和灵R） 葡萄糖检测试剂盒白屈莱红碱(Chelerythrine Chloride，CC)α-sarcometric actin单克隆抗体罗丹明(TRITC)标记的小鼠抗大鼠二抗PKB多克隆抗体P-Ser473PKB多克隆抗体碱性磷酸酶(ALP)标记的羊抗兔二抗二氧化碳培养箱倒置显微镜超低温冷冻冰箱Western blotting全套设备ECL成像仪GraphPad Prism5软件采用胰蛋白酶和Ⅰ胶原酶联合消化、多次滤网过滤及差速贴壁法得到较高纯度的骨骼肌细胞，免疫荧光方法鉴定原代大鼠骨骼肌细胞，PA作用细胞后，胰岛素刺激15min，氧化酶-过氧化物酶偶联法（GOD-POD法）检测培养液中葡萄糖浓度。设立对照组、PA组、罗格列酮组（Rosiglitazone，Ros组），每组一分为二，胰岛素刺激15min前，分别加与不加PKC抑制剂CC作用1h，Western Blot方法检测PKB蛋白及其磷酸化(P-Ser473 PKB)水平。 结果: PA组P-Ser473PKB的表达显著低于对照组和罗格列酮组。 PA加CC组P-Ser473PKB表达与本组未加CC相比显著升高。 对照组、PA组及罗格列酮组的PKB蛋白水平无明显变化。 结论: 一定浓度的PA可诱导骨骼肌细胞产生IR;胰岛素增敏剂罗格列酮可减轻PA诱导的骨骼肌细胞IR;在增加胰岛素敏感性方面，PKC抑制剂CC与罗格列酮有相似的作用，二者均能改善PA引起的IR。
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