摘要
近年来分析生物化学及医学领域一直致力于研发操作简单、灵敏度高、特异性强的量化分析及检测方法。其中时间分辨荧光免疫法(TRFIA)近年来发展得十分迅速,它具备灵敏度高,便于自动化操作,不易受基体干扰,可以同时实现多标记等优点,这些优势使其在众多免疫方法中逐渐占据重要地位。与传统的荧光素标记不同,TRFIA充分利用了稀土元素配合物这类荧光物质荧光寿命长及Stokes位移大的特点,有效地克服短寿命的背景荧光对测定的干扰,使非特异性本底信号降低到可以忽略的程度,达到了很高的信噪比。其中固相TRFIA是新一代的TRFIA方法,它克服了原来的液相TRFIA需要增强液、易受环境Eu3+污染等缺点,简化了测量步骤,提高了测量灵敏度。 在此次研究中,作者首先运用一种新型双功能螯合物Eu(TTA)3(5-NH2-phen)(ETNP)用来标记羊抗人IgG建立了一种新的固相双抗体夹心免疫法。这种新型的螯合物具备强荧光、长寿命等特点,与羊抗人IgG结合后不易解离,可直接在固相玻片上检测到较强的荧光信号。固相双抗体夹心法操作简单,其最终复合物可直接在玻片上进行检测。由荧光仪检测得出的荧光信号强度与抗原浓度成正比,因此也可以运用此方法作为定量分析的依据。实验证明,运用ETNP作为标记物而建立起来的固相荧光免疫方法最低可检测到5μg/L,而RIA最低检测限仅为800～1000μ g/L,ELISA最低只能检测到200μ g/L。这是该新型荧光标记物ETNP第一次运用于固相时间分辨荧光免疫分析方法中抗原抗体的定性定量分析,该方法具有操作简单,检测限低、高灵敏度等特点。然后,在人IgG检测体系确定的基础上,作者还利用同样的实验体系及这种双功能螫合物检测甲胎蛋自AFP进行定量检测,取得的较好的结果,最低可检测到22μg/L,重复性良好。 通过此次实验体系证明运用新型双功能标记物ETNP建立起来的固相时间分辨体系在抗原抗体检测中具有是一种具有巨大潜力,可以应用于临床医学、生物化学分析等多种领域。
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