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摘要
目的：随着社会老龄化程度的增加，神经退行性疾病已严重影响老年人的生活质量，同时给社会及家庭带来很大的压力和负担。老年性痴呆的重要病理类型就是阿尔茨海默症(AD)，据统计全世界AD患者已超过2000万。但由于脑组织的天然生理屏障—血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)的存在，使98%以上强有力的药物无法通过血脑屏障靶向于脑，发挥中枢治疗作用。鼻腔与脑组织间存在着解剖学上的直接联系，鼻腔给药后部分药物可经嗅粘膜吸收进入嗅球或脑脊液，从而绕过BBB直接转运入脑，发挥中枢治疗作用。因此鼻腔给药是以非侵入性的给药方式提高药物的脑内递释，具有安全、有效、便捷的特点。血管活性肠肽(vasoactive intestinalpeptide，VIP)是一种含28个氨基酸的神经肽，具有显著的促进记忆和智力的作用，本文结合VIP的理化性质和鼻腔给药的特点，制备一种使用方便，患者顺应性好，起效快，局部用药刺激性小的鼻腔给药剂型，为该药的临床应用提供依据。 方法：本文首先采用HPLC方法，对VIP在不同pH值、不同离子强度溶液、温度以及人工胃液和人工肠液中的稳定性进行了考察，对VIP的生物学及化学稳定性进行了初步的了解，为VIP的制剂学研究奠定基础。采用蟾蜍上颚粘膜为模型，考察了VIP主药，不同种类的壳聚糖、吸收促进剂及防腐剂对鼻纤毛运动的影响，采用在体蟾蜍上颚粘膜法对不同吸收促进剂的VIP鼻腔喷雾剂进行了处方筛选。采用大鼠在体鼻腔循环灌流法，对不同浓度的壳聚糖和不同种类的吸收促进剂对VIP在大鼠鼻腔中的吸收促进作用进行了考察，最终确定处方。采用Aβ25-35侧脑室注射诱导AD动物模型，通过VIP不同给药方式，由Morris水迷宫实验评价该给药系统对小鼠空间记忆障碍的改善作用。最后，从对家兔眼部刺激性、大鼠鼻纤毛形态及大鼠鼻粘膜组织切片几方面对VIP鼻腔喷雾剂的安全性进行了评价，为该制剂的应用提供依据。 结果：研究的结果表明，VIP的化学稳定性具有pH依赖性，VIP在酸性及中性条件下稳定，pH≤7时几乎无降解，但VIP在碱性条件下不稳定，pH=13时30min已完全降解。此外，离子强度对其稳定性无影响。VIP的化学稳定性同时具有温度依赖性，冷冻条件下稳定。另一方面，VIP的生物学性质不稳定，在人工胃液和人工肠液中极易被降解，所以不适于口服给药。 纤毛毒性实验结果表明，药物对蟾蜍上颚粘膜纤毛运动没有影响，吸收促进剂纤毛毒性大小顺序为：EDTA(0.1%)＜PEG4000(2.5%)＜HP-β-CD(5%)＜β-CD(2%)，通过筛选防腐剂选择三氯叔丁醇。基质选择毒性较小的壳聚寡糖，基质在低浓度时纤毛毒性较小，随着浓度的增加纤毛毒性随之增大。用在体法对四种不同处方纤毛毒性进行了考察，四种不同处方纤毛毒性大小顺序为：β-CD(2%)处方＜HP-β-CD(5%)处方＜EDTA(0.1%)处方＜PEG4000(2.5%)处方，由纤毛毒性结果选择β-CD和HP-β-CD为吸收促进剂。 大鼠鼻腔在体循环实验结果显示随着浓度的增加，VIP的鼻粘膜吸收量亦有所增加，说明鼻粘膜对VIP的吸收过程属于被动扩散，VIP的鼻黏膜吸收呈零级动力学，剩余药量与时间之间有良好的线性关系。吸收速度常数(K)随着药物浓度的增加没有太大变化，使用q检验对不同浓度VIP鼻腔吸收速率常数(K)进行两两比较，结果显示各组之间没有显著性差异(P＞0.05)。考察了壳聚对VIP的促吸收作用，结果表明随着壳聚糖浓度增加VIP的吸收速率常数(K)也随之升高，而且对鼻腔吸收速率常数(K)使用q检验进行两两比较，彼此之间都存在显著性差异(P＜0.05)，壳聚寡糖对VIP的鼻腔吸收有明显的促进作用，并筛选了壳聚糖最佳用量为1.5%。考察了β-CD、HP-β-CD与壳聚糖合用的促吸收效果，吸收速度常数(K)分别为0.0077和0.0098，比单纯的同浓度VIP水溶液分别提高了7倍和9倍，最终确定HP-β-CD(5%)为VIP鼻腔喷雾剂的吸收促进剂。 Morris水迷宫实验结果表明空白模型组小鼠表现出明显的空间记忆障碍特征，与正常对照组存在显著性差异，说明老年痴呆模型建模成功；皮下注射及鼻腔给予VIP水溶液，随训练天数的增加，小鼠潜伏期并没有明显缩短的趋势，结果和空白模型组无统计学差异；以40μg/ml的剂量鼻腔给予VIP鼻腔喷雾剂后，小鼠的空间记忆有所改善，却与模型组无统计学差异；以200μg/ml的剂量鼻腔给予VIP鼻腔喷雾剂后，对小鼠的空间记忆障碍起到了明显的改善作用，实验结果和正常对照组无显著性差异，说明该给药系统可有效的增加VIP的入脑量，对小鼠中枢胆碱能系统发挥了一定的保护作用。 毒性实验结果表明，该制剂刺激性积分为1.375分，在0-3分之间，按照眼部刺激性评价标准刺激程度属于无刺激性，给药一周后，大鼠鼻粘膜下少量的炎性细胞浸润，鼻纤毛完整，只有轻微的毒性，而且损伤可逆，VIP鼻腔喷雾剂基本安全可靠。 结论：本研究制备的VIP鼻腔喷雾剂处方设计合理，性能稳定，鼻腔给药安全性评价其毒性较小，并且对鼻粘膜的损伤可逆，本剂型使用方便，药效学实验表明药效可靠，基本达到了实验设计的目的。
关键词
血管活性肠肽/鼻腔喷雾剂/鼻腔给药剂型/纤毛毒性/Aβ25-35/Morris水迷宫实验/血脑屏障引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
药剂学导师
王志敏/郑爱萍学位年度
2011学位授予单位
河北医科大学语种
中文