半滑舌鳎微卫星标记开发及在雌核发育群体评价中的应用

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中文摘要：半滑舌鳎(Cynoglossussemiliaevis)是我国特有的一种名贵经济海水鱼类，属于近海温水性底层鱼类，我国沿海均有分布，以黄海、渤海为多。市场价值极高，养殖前景非常广阔，是目前我国北方沿海海水鱼类养殖的主要品种之一。本文主要进行了三方面的工作，一是半滑舌鳎多态微卫星标记的开发、筛选；二是利用SSR标记分析半滑舌鳎养殖群体和减数雌核群体的遗传多样性；三是利用SSR标记评价半滑舌鳎雌核发育二倍体的纯合性。主要研究结果如下：本文中，半滑舌鳎微卫星富集文库的构建采用了FIASCO(fastisolationbyAFLPofsequencescontainingrepeats)方法，通过克隆、测序得到68条序列含有微卫星重复序列，对这68条序列进行分析，成功设计出45对微卫星引物，经过多态筛选最终获得22个多态的微卫星位点。采用生物学信息技术从半滑舌鳎GenBank数据库中下载获得150条DNA序列，利用软件成功设计出106对微卫星引物，经过多态筛选获得65个多态的微卫星位点。这些多态位点可以为半滑舌鳎的遗传连锁图谱构建、种质资源评估、遗传多样性分析、分子标记辅助育种等研究提供了候选标记。利用24对微卫星引物对半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)的养殖群体和减数分裂雌核发育群体进行遗传多样性分析。结果表明，两个半滑舌鳎群体平均等位基因数分别为7.0和4.8，平均有效等位基因数分别为3.935和2.411，平均观测杂合度(Ho)分别为0.7135和0.5865，养殖群体的遗传多样性明显高于减数分裂雌核发育群体。有1个位点在养殖群体中偏离哈代一温伯格平衡，13个位点在减数分裂雌核发育群体中偏离哈代-温伯格平衡。群体间基因分化系数(GST)为0.0936，遗传距离为0.4200，表明两群体间遗传分化显著。本实验对半滑舌鳎卵裂雌核发育诱导条件进行了筛选，筛选出了利用鲈鱼精子诱导半滑舌鳎卵裂雌核发育的的最佳条件：经紫外线(40mJ·Cm-2)灭活的鲈鱼精子与半滑舌鳎卵子授精后22min，保持海水水温23℃，用静水压在70MPa下处理4min，成功获得卵裂雌核发育二倍体。利用8对微卫星标记分别对半滑舌鳎减数雌核发育二倍体和卵裂雌核发育二倍体的纯合性进行检验。结果显示：八个位点中，被检的减数分裂雌核发育二倍体中无全部纯合的个体，在hxts24位点全部为杂合。杂合比例最低的位点是hxts18，为30％。8个位点的平均杂合子比例为79.16％。在被检的卵裂雌核发育半滑舌鳎二倍体中，有9尾在所检测的八个位点全部纯合，纯合个体比例为30％；21尾半滑舌鳎在八个位点未达全部纯合，杂合个体比例为70％。八个微卫星位点中，纯合子比例最高为93.33％(hxts3)，纯合子比例最低为76.67％(hxts22，hxts24)，平均纯合子比例为83.76％，平均杂合子比例仅为16.24％。结果表明，人工诱导半滑舌鳎减数分裂雌核发育出现很高的重组率，很难获得纯合的半滑舌鳎二倍体；通过静水压抑制第一次卵裂可以获得完全纯合的半滑舌鳎，但同时也存在部分杂合子。

作者：

徐营

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关键词：

半滑舌鳎微卫星标记遗传多样性雌核发育纯合性

授予学位：

硕士

学科专业：

动物遗传育种与繁殖

导师：

陈松林

学位年度：

2011

学位授予单位：

上海海洋大学

语种：

中文

中图分类号：

Q95