摘要
虎纹蛙(Hoplobatrachus Rugulosus)广泛分布于我国的南方诸省,由于其个体大,肉味鲜美,营养丰富,是一种很好的食用蛙,因此多年来一直遭到过度捕捉,再加上生境的退化以及农药泛滥使用等因素的影响,虎纹蛙的野生资源急剧减少,有的地区应经难以见到虎纹蛙的踪迹。目前虎纹蛙已经被列为国家二级保护珍稀濒危动物,IUCN和中国物种红色名录均将其列为易危种,并被列入了CITES附录Ⅱ。浙江省虽然有着较为丰富的虎纹蛙资源,但是近年来数量也在不断地减少。本人对浙江省7个地区(昌化、临安、汤溪、长山、永康、丽水和青田)虎纹蛙种群进行遗传学方面的研究,通过对线粒体基因的控制区部分序列进行分析,以此得出有关浙江地区虎纹蛙遗传多样性和种群间亲缘关系的结果,并为浙江地区虎纹蛙资源的保护和利用提供一定的理论依据。通过对69份虎纹蛙样本进行研究,得到了69条线粒体DNA控制区的部分序列,进行分析后结果如下: 1.所得序列的碱基A、T、C、G的平均含量分别为30.4%～31.9％(平均为31.1％)、28.9％30.7％(平均为30.0％)、27.1%～28.3％(平均为27.7％)、10.5%～11.4％(平均为11.2％)。其中AT含量比较丰富； 2.经过校对后得到的序列片段大小为332 bp,包含了保守位点292个,变异位点有40个,其中单一多态位点(Singleton variable sites)6个,简约信息位点(Parsimonv informativesites)34个,占整个序列长度的10.24％； 3.得到的69条序列中包含了38种单倍型(Haplotypes),单倍型多样性(Haplotypes diversity)为0.983,核苷酸多样性(Nucleotide diversity)为0.02226,平均核苷酸差异数(Averagenumber of nucleotide differences)为7.390,这表明浙江地区的虎纹蛙具有较高的遗传多样性； 4.使用Tajima’s方法进行中性检验,Tajima’s D值为-0.36672(P>0.10),Fs值为-18.364(P>0.10),经检验均不显著(P>0.10),证明所有个体变异都符合选择中性。这也说明了这个几个地区的虎纹蛙种群大小保持稳定； 5.计算K值、Dxy值和Da值所反映的结果基本一致； 6.通过MEGA4.1计算种群间的遗传分化距离和DNASP4.10计算不同群体间的遗传分化系数,发现长山种群和汤溪种群、昌化种群和临安种群之间的亲缘关系较近； 7.通过UPGMA法、ME法和MP法进行聚类分析,发现与SSR有关研究结果有一定的差异。 基于以上结果和虎纹蛙养殖现状,提出以下保护建议: 1.保护虎纹蛙栖息地生境,并进行就地保护和迁地保护； 2.在选种时应采用谱系选择和个体表型选择相结合的系群间杂交的方式来保持该品种的遗传特质和最大限度地保持群体的遗传多样性； 3.应尽快建立起各个品种的种源基地,制定科学的遗传管理体制,既保存具有典型遗传特质和较高遗传多样性水平的群体,又为生产单位提供优良种源。
NETL