摘要
[目的]通过转染Sp1反义寡核苷酸(ASODN)进入大鼠肝星状细胞(HSC-T6)，了解HSC的凋亡和Sp1活性，以及其产生细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及血小板源性生长因子-B(PDGF-B)的改变，探讨Sp1 ASODN治疗肝纤维化的可能机制，为利用SP1 ASODN治疗肝纤维化提供理论基础。 [方法]取第3-6代生长良好的大鼠HSC细胞，人工合成SP1 ASODN并行全程硫代磷酸化修饰。脂质体转染法转染SP1 ASODN进入HSC，台盼蓝染色排斥法检测SP1 ASODN对HSC的毒性实验。流式细胞仪检测脂质体转染SP1 ASODN对HSC凋亡的影响。采用凝胶迁移率试验(EMSA)法检测SP1 ASODN对TNF-α刺激HSC的SP1活性影响。应用RT-PCR和ELISA方法检测脂质体介导的不同浓度SP1ASODN(0、0.1、0.5、0.8、1.0μmol/L)对TNF-α刺激HSC产生ICAM-1及PDGF-BmRNA和蛋白的影响。 [结果]毒性实验表明，SP1 ASODN在0.1～1.0μmol/L浓度对于体外培养传代大鼠HSC无明显毒性。TNF-α刺激HSC后SP1活性增强，应用SP1 ASODN(0.1～1.0μmol/L)作用后，SP1活性明显减弱，呈剂量依赖性(P<0.05)。SP1ASODN浓度在0.1～1.0μmol/L时诱导HSC的凋亡，以浓度1.0μmol/L作用最明显，呈剂量依赖性(P<0.05)。转染SP1 ASODN(0.1-1.0μmol/L)明显减少TNF-α诱导HSC的ICAM-1、PDGF-B的mRNA表达和蛋白分泌，亦呈剂量依赖性(P<0.05)。 [结论]Sp1 ASODN在0.1～1.01μmol/L浓度对于HSC-T6无明显毒性，为转染Sp1 ASODN进行肝纤维化治疗提供可能性；转染Sp1 ASODN进入活化的HSC后，能特异性降低Sp1的活性，从而削弱Sp1的促增殖作用，减少ICAM-1、PDGF-B等Sp1下游致纤维化因子的表达，为Sp1 ASODN作为新的方法治疗肝纤维化提供理论依据。
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