摘要
柴胡是我国的传统中药和常用中药，具有显著的抗炎作用。在过去的研究中，我们从小叶黑柴胡根部提取出的柴胡多糖，对急性肺损伤和系统性红斑狼疮具有良好的防治效果，并在离体研究中显示出显著的抗补体活性。药物对补体引起的巨噬细胞的吞噬和趋化功能改变上，也表现出强烈的作用。我们从北柴胡中提取的多糖在离体研究中也显示出显著的抗补体活性，且对小鼠急性肺损伤也具有良好的防治效果，而其抗炎作用机制尚未清晰。因此我们选取北柴胡多糖探讨它对巨噬细胞功能上的影响。其中包括对吞噬、趋化和分泌前炎症因子功能的影响；在巨噬细胞吞噬功能方面，我们观察北柴胡多糖对不同类型物体的吞噬作用。在巨噬细胞趋化功能方面，研究北柴胡多糖对补体激活产物刺激趋化作用的影响，并进一步研究补体趋化产物中的两种主要趋化因子C3a与C5a，观察北柴胡多糖对它们刺激的巨噬细胞趋化功能的调节作用。在分泌前炎症因子方面，主要观察北柴胡多糖对巨噬细胞分泌NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-12等细胞因子的影响。通过以上各方面的研究，探究北柴胡多糖抗炎的可能作用机制，为其进一步的药理机制研究提供可靠基础。 第一章北柴胡多糖对巨噬细胞吞噬功能的调节作用 目的：研究北柴胡多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响。 方法：分离小鼠腹腔巨噬细胞。实验分为吞噬鸡红细胞、绵羊红细胞、FITC标记金黄色葡萄球菌。每组中分别给以6个剂量的柴胡多糖(320、160、80、40、20、10μg/mL)。应用显微镜观察各组巨噬细胞吞噬情况，计数吞噬百分率和吞噬指数，并计算巨噬细胞的平均吞噬率，其中荧光标记细菌采用Image-pro进行荧光面积和累计光密度的计算，并作为观察指标。 结果：体激活产物可使腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数显著高于空白对照组(P＜0.01)；单用北柴胡多糖(320、160、80、40、20、10μg/mL)能显著促进腹腔巨噬细胞的吞噬功能(P＜0.01)；但显著抑制补体激活产物诱导的巨噬细胞的吞噬功能增强(P＜0.01)。 结论：北柴胡多糖能促进巨噬细胞对多种异物的吞噬功能，但对补体激活产物引起的巨噬细胞吞噬功能增强后，则表现出抑制作用。 第二章北柴胡多糖对巨噬细胞趋化功能的调节作用 目的：研究北柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响。 方法：小鼠腹腔巨噬细胞。实验分四部分，分别为北柴胡多糖对巨噬细胞趋化功能的影响，北柴胡多糖对补体激活产物刺激的巨噬细胞趋化功能的影响，北柴胡多糖对C3a刺激的巨噬细胞趋化功能的影响以及北柴胡多糖对C5a刺激的巨噬细胞趋化功能的影响。 结果：用北柴胡多糖(320、160、80、40、20、10μg/mL)对腹腔巨噬细胞的趋化功能有显著促进作用(P＜0.05)；补体激活产物以及趋化因子C3a和C5a也使腹腔巨噬细胞趋化指数显著高于空白对照组(P＜0.05)；对补体激活产物和C5a引起的巨噬细胞吞噬增强，北柴胡多糖则具有显著地抑制作用(P＜0.01)；在加入C3a刺激巨噬细胞趋化的情况下，北柴胡多糖不表现出任何抑制作用。 结论：北柴胡多糖能促进腹腔巨噬细胞的趋化功能，但能抑制补体激活产物诱导的巨噬细胞趋化功能。作为补体激活产物中的两种主要趋化因子C3a和C5a，北柴胡多糖对其诱导巨噬细胞趋化功能的影响效应不一，表现出北柴胡多糖对趋化的抑制作用主要在C5a这一趋化因子上。 第三章北柴胡多糖对巨噬细胞分泌前炎症因子功能的影响 目的：研究北柴胡多糖对巨噬细胞分泌前炎症因子的影响。 方法：分离小鼠腹腔巨噬细胞。1)加入不同浓度(320、160、80、40、20、10μg/mL)的北柴胡多糖，观察在无刺激条件下，柴胡多糖对巨噬细胞分泌前炎症因子的影响。2)在LPS刺激的条件下，再加入北柴胡多糖(320、160、80、40、20、10μg/mL)，观察北柴胡多糖对LPS刺激巨噬细胞分泌前炎症因子功能的影响。 结果：1)在无刺激条件下，北柴胡多糖能增强巨噬细胞分泌前炎症因子(P＜0.01)；2)LPS(1ug/ml)刺激作用下，巨噬细胞分泌前炎症因子功能显著增强。加入北柴胡多糖后，有一定的下降趋势，但效果不显著，只有高浓度(320、160、80ug/ml)具有显著性(P＜0.05)。 结论：北柴胡多糖能促进巨噬细胞分泌功能，但对LPS诱导的巨噬细胞分泌功能的增强有一定的抑制作用。
NETL