摘要
目的: 研究阿霉素肾病大鼠模型中的内皮型一氧化氮合酶表达和氧化应激状态,以及黄芪在其中的影响,探讨黄芪改善蛋白尿的机制。 方法: 一次性尾静脉注射阿霉素(6mg/kg)建立肾病综合征模型,将大鼠随机分为正常对照组(Norm),阿霉素肾病组(ADR),ADR+黄芪水提物组(2.5g·kg-1·d-1)(ARE)及ADR+苯那普利组(10mg·kg-1·d-1)(ACEI),每组6只。用药10周后,常规检测血、尿生化指标,双缩脲法测定24h尿蛋白定量,并行肾组织病理学检查。硝酸还原酶法测定小鼠24小时尿NO3-/NO2-排泄量；比色法测定大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平；放免法测定肾皮质中cGMP含量；免疫组织化学染色法观察eNOS在肾组织中的表达。 结果: 1)黄芪水提物(ARE)和苯那普利(ACEI)均能明显降低24小时尿蛋白排泄量(88.32±9.96mg/24h,81.78±16.28mg/24h vs.153.91±28.63mg/24h,P<0.01),且两组之间无明显差异(P>0.05)。 2)苯那普利组和黄芪组用药后肾皮质中CAT水平均高于阿霉素肾病组(414.15±29.88U/gprot,382.40±21.79 U/gprot VS.284.25±17.97 U/gprot,P<0.05),低于正常对照组(457.7±29.36 U/gprot,P<0.05)。苯那普利组和黄芪组肾皮质中GSH-Px水平均高于阿霉素肾病组(83.24±10.97活力单位,93.51±7.23活力单位VS.69.07±6.68活力单位,P<0.05),低于正常对照组(116.71±10.08活力单位,P<0.05),黄芪组高于苯那普利组(P<0.05)。黄芪组肾皮质中SOD水平高于阿霉素肾病组(117.15±23.38U/mgprot VS.94.89±10.91U/mgprot,P<0.05),低于正常对照组(147.38±20.99U/mgprot,P<0.05),苯那普利组未见SOD升高(106.25±7.30U/mgprot,P>0.05)。 3)苯那普利组和黄芪组用药后肾脏中MDA水平低于阿霉素肾病组(8.72±1.27nmol/mgprot,5.85±0.83nmol/mgprot VS.10.10±1.40nmol/mgprot,P<0.05),黄芪组低于苯那普利组(P<0.01)。 4)阿霉素肾病组较正常组尿N03-/NO2-排泄量显著上升(266.39±14.38μmol/l VS.124.29±13.11μmol/l,P<0.05),黄芪组用药后尿N03-/N02-排泄量显著下降(161.49±13.43μmol/l vs.266.39±14.38μmol/l,P<0.05),苯那普利组大鼠尿NO3-/NO2-排泄量则未见明显下降(216.26±20.96μmol/l,P>0.05)。 5)阿霉素肾病组较正常组肾皮质中cGMP水平显著上升(1.1717±0.1265pmol/g VS.0.7667±0.0682 pmol/g,P<0.05),苯那普利组和黄芪组均能降低肾皮质中cGMP水平低于阿霉素肾病组(1.1217±0.1994pmol/g,0.8017±0.0748pmol/g,P<0.05),且黄芪组低于苯那普利组(P<0.05)。 6)免疫组织化学染色显示,各组肾组织均检到eNOS表达。在小球和小管中eNOS的表达,阿霉素肾病组阳性率阳性率都明显高于正常对照组(22.97±2.10％,9.75±0.44％vs.8.11±0.65％,3.73±0.66％,P<0.05),黄芪组与苯那普利组都显著低于阿霉素肾病组(11.04±1.17％,4.47±0.72％；15.10±2.10％,8.03±1.24％,P<0.05)。且黄芪组低于苯那普利组(P<0.01)。 7)24dx时尿蛋白与MDA呈正相关(r=0.895,P<0.01),与SOD呈负相关(r=0.861,P<0.01),与肾皮质中cGMP呈负相关(r=0.666,P<0.01),与肾小球中eNOS阳性率呈正相关(r=0.910,P<0.01)。 结论: (1)阿霉素肾病时存在氧化应激亢进,eNOS表达上调,尿NO3-/NO2-排泄增加。 (2)黄芪水提物(ARE)能减轻蛋白尿,保护阿霉素肾病大鼠。 (3)ARE可减轻ADR大鼠蛋白尿,其机制可能是通过直接抑制阿霉素大鼠肾组织eNOS的过度表达,减少NO合成,以及提高抗氧化物酶活性,抑制自由基(包括由NO衍生的氧自由基和活性氧)对肾组织的氧化损伤,减轻ADR肾脏病变。
NETL