摘要
目的 1.研究足细胞在IgA肾病(IgA nephropathy，IgAN)大鼠肾组织中的病变及TNF-α、IL-6与足细胞损伤的关系。 2.初步观察和探讨槐杞黄(Huai Qi Huang，HQH)在IgAN大鼠模型肾损伤中的保护作用和可能作用机制。 方法 分组：清洁级SD雌性大鼠44只，先随机分成四组：正常组即实验对照组(C组)8只，模型组(M组)12只、地塞米松组(D组)12只、槐杞黄组(H组)12只。 造模：IgAN大鼠模型的制备及干预：实验第1天起隔日灌服牛血清白蛋白(BovineSerum Albumin，BSA)400mg/kg，持续8周；于第6周大鼠尾静脉注射BSA20mg/kg，每周1次，持续3次；第6周、第8周尾静脉各注射0.3mg/kg脂多糖(LPS)1次；实验开始后每周皮下注射四氯化碳0.1ml(持续10周)，观察至12周末。M组、H组、D组造模使用的药物如上所述，C组以等量的生理盐水代替造模使用的药物。 药物干预：给药方法：D组、H组：在造模过程中，第4周末大鼠开始出现明显的尿蛋白后，到第12周末尿蛋白达到高峰，第13周起D组予地塞米松针2.5mg/kg腹腔注射，每天1次，H组予槐杞黄2g/kg(以蒸馏水配制为0.4g/mL)每日灌服，其余各组以生理盐水代替，连续4周。 检测内容：全自动生化分析仪检测24h尿蛋白，直接免疫荧光法观察肾小球IgA的沉积情况；光镜观察肾组织病理改变；透射电镜观察足细胞的形态；免疫组化法检测肾组织足细胞数量的变化，酶联免疫吸附试验(Enzyme LinkedImmunosorbent Assay，ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factoralpha，TNF-α)、白细胞介素6(Interleukin-6，IL-6)水平。 结果 1.24h尿蛋白定量结果：造模期间大鼠于第4周末即开始出现明显尿蛋白，并逐周增加，至第12周末达高峰，后趋于稳定，M组与C组比较有显著性差异(P<0.01)。13周起经药物干预后，D组、H组大鼠尿蛋白均有不同程度减轻，与M组相比均有显著性差异(P<0.01)，D组与H组比较有显著差异(P<0.01)。 2.免疫荧光：M组大鼠。肾组织均发现IgA沉积，沉积率为100％，荧光强度为(3+～4+)，C组大鼠无明显IgA沉积，D组和H组肾组织均有IgA沉积，沉积率为100％，荧光强度分别为(±～2+；1+～2+)。 3.光镜检查：C组大鼠肾小球体积正常，系膜细胞及基质未见增生，毛细血管袢开放良好，肾间质无淋巴细胞浸润。M组大鼠肾小球体积增大，系膜区明显增宽，系膜细胞和系膜基质中度增生为主，可见肾小球与球囊粘连，偶见细胞新月体形成，肾间质有淋巴细胞浸润。各治疗组大鼠肾小球体积轻度增大，系膜区增宽不明显，系膜细胞和系膜基质以轻度增生为主，无新月体形成和硬化，肾间质有少数淋巴细胞浸润。 4.电镜检查：C组肾小球基底膜光滑均匀，未见增厚，足突清晰完整、未见融合，系膜区未见电子致密物沉积。M组肾小球可见足突大部分融合、部分消失，出现部分微绒毛，系膜区可见致密物沉积。H组大鼠肾小球基底膜基本光滑均匀，足突融合减轻；D组足突清晰，甚至接近C组。 5.Wilms肿瘤抑制基因(Wilms tumor suppressor gene，WT1)免疫组化：C组足细胞数(肾小球内WT1阳性细胞)最多，与其他组相比，有统计学意义(P<0.05)；M组足细胞数明显低于其他组(P<0.05)，D组与H组之间足细胞数量差异无显著性(P>0.05)。WT1在M组肾小管内可见明显表达，D组、H组肾小管内表达较M组减轻，而C组肾小管未见明显表达。 6.ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-6水平的变化：M组TNF-α、IL-6水平明显增高，与其他组相比有统计学意义(P<0.05)；D组与H组相比，血清中TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)，C组细胞因子水平稍低于D组，但差异无显著性(P>0.05)。 7.相关性分析：大鼠肾组织足细胞数与尿蛋白之间呈负相关(r=-0.789，P<0.05)，足细胞数与TNF-α之间呈负相关(r=-0.645，P<0.05)。足细胞数与IL-6之间呈负相关(r=-0.693，P<0.05)。 结论： 1.IgAN大鼠模型中存在足细胞的损伤，可能参与IgAN中尿蛋白的发生和发展 2.槐杞黄能改善IgAN大鼠模型的肾脏病理变化，减轻尿蛋白排泄，其部分机制可能通过下调血清IL-6及TNF-α的水平起到保护足细胞的作用 3.WT1可能是IgAN肾小管早期损伤敏感的检测指标
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