摘要
目的： 建立评价大鼠肝微粒体药物代谢酶细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP450)不同亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的“Cocktail”探针药物溶液的高效液相色谱检测方法；优化肝微粒体孵育条件，建立肝微粒体体外孵育体系，研究丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体该6种主要CYP450亚型体外代谢活性的影响，为临床合理用药提供参考。 方法： 选择CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特异性代谢底物咖啡因、美托洛尔、奥美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪达唑仑制备成“Cocktail”探针溶液，建立同时测定该6种探针药物在肝微粒体中的高效液相色谱检测方法。通过优化微粒体蛋白浓度和孵育时间，建立肝微粒体体外孵育体系。研究丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体内6种主要CYP亚型活性的影响。实验分三组进行：丹参酮ⅡA组、空白对照组和无活性组(不加大鼠肝微粒体组)，每组实验平行三个样本。应用高效液相色谱.紫外检测(HPLC-UV)法检测大鼠肝微粒体中丹参酮ⅡA对探针底物代谢剩余量的影响，得到酶活性百分数，以丹参酮ⅡA浓度的对数为横坐标，以酶活性百分数为纵坐标，使用GraphPad Prism5.0软件按照非线性回归，作图并计算IC50值。评价丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体孵育体系中对CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4体外代谢活性的影响。 结果： 1.本研究所建立的高效液相色谱方法，可以同时测定6种探针药物咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑在肝微粒体中的浓度，各吸收峰分离完全，线性关系良好，准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求，操作简便。 2.低浓度(0.5、1、2、4、8、16μmol·L-1)丹参酮ⅢA对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性无显著性影响(P>0.05)，而高浓度(32和96μmol·L-1)丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(P<0.05)。丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50值分别为32.48、34.76、26.12、26.29和26.38μmol·L-1，表示对其具有弱抑制作用。 结论： 1.本研究建立的大鼠肝微粒体中的“Cocktail”探针药物法操作简便，精密度、准确度、灵敏度高，检测周期短，能够同时评价药物在体外对大鼠肝微粒体6种主要CYP450亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。 2.丹参酮ⅡA在体外大鼠肝微粒孵育体系中对CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代谢活性具有较弱的抑制作用。临床上通常不易发生代谢性药物相互作用。
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