摘要
利用啤酒酵母酶系催化腺苷磷酸化合成三磷酸腺苷,是最具应用前景的三磷酸核苷生产方法之一。认识反应机理,优化生产工艺、提高产率、降低成本是当前三磷酸核苷工业化生产急待解决的问题。 本文对酿酒酵母全细胞催化腺苷磷酸化合成三磷酸腺苷的机理进行了探讨,主要从以下四个方面进行了研究: 1、膜透性对ATP积累的影响。通过研究不同促渗透剂:新型促渗透剂I5、甲苯、气流干燥及吐温100,细胞活性(酒精生产能力)与细胞合成ATP的关系,探讨新型促渗透剂I5破壁效果以及对细胞酶系合成ATP活力的影响。 2、线粒体对ATP积累的影响。对细胞膜及细胞酶系的深入研究,实验室自身合成了新型促渗透剂I5,通过添加线粒体解偶联剂二硝基苯酚与否,研究了线粒体对细胞酶系磷酸化合成ATP的贡献。 3、无机小分子对ATP积累的影响。通过研究几种主要的金属离子(如Mg2+,K+和Na+)对酿酒酵母合成ATP过程的影响,初步探讨了酿酒酵母合成ATP的反应机理。 4、对酿酒酵母磷酸化合成三磷酸腺苷的机理有初步认识的基础上,对以下11个因素进行实验设计:A腺苷,B葡萄糖,C酵母,D硫酸铵,E硫酸镁,F氯化钠,G磷酸二氢钾,H新型促渗透剂I5,I2,4-二硝基苯酚,J pH,K温度。 最终转化率为99.1%,ATP得率为38g/L,较报导的水平90%提高了近10%,得率提高近2倍。 基于磷酸化机理研究成果,完成了酿酒酵母全细胞催化腺苷磷酸化合成三磷酸腺苷的中试。