摘要
目的：据估计0.5%的妊娠妇女是癫痫患者。妊娠期间癫痫发作对孕妇的主要危险：一是，大约有1/3的孕妇发作频率较前增加；二是，母源性并发症对胎儿尤其是对胎儿脑的影响。癫痫母亲的孩子出生时阿普加评分低于同龄儿，而围产期死亡率却高于同龄儿。不同的研究者观察到服用抗癫痫药和未服用抗癫痫药的癫痫孕妇的胎儿宫内发育迟滞率均较高，表明母源性癫痫可能直接影响胎儿的发育。然而，癫痫性病症的详细机制及潜在的影响尚不明确。本文通过给予腹腔注射戊四氮(pentylenetetrazol，PTZ)慢性点燃Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠，点燃成功后与雄性SD大鼠合笼。妊娠大鼠继续给予戊四氮以诱导癫痫发作(35 mg/kg PTZ15天)。运用Western Blot方法测定胚胎15.5天脑组织中糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)、磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白表达水平。运用免疫组织化学方法测定胚胎15.5天脑组织中磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白表达水平及分布。 方法：通过每天给予腹腔注射PTZ建立慢性点燃癫痫模型。将雌性SD大鼠45只(7-8周，起始体重200±20 g)随机分为癫痫组(PTZ组)，盐水组(NS组)和正常对照组(NC组)，每组大鼠15只。自实验第一天起，PTZ组大鼠每天上午9:00腹腔注射PTZ35 mg/kg，直到点燃。第二组动物给予腹腔注射相应计量的生理盐水。正常对照组不给任何处理。每次给予PTZ注射后立刻观察45分钟，按照Becker等改良的Racine分级标准：0级，无任何异常反应；1级，耳朵抖动和颜面部的搐动；2级，肌阵挛性发作但未站立；3级，肌阵挛性发作伴站立；4级，翻转侧位倒地，阵挛-强制性发作；5级，翻转背部倒地，泛发性阵挛-强制性发作。连续3次获得Ⅳ级或Ⅳ级以上的运动性惊厥的大鼠为3完全点燃。待癫痫组大鼠点燃成功后，将雌性SD大鼠与雄性SD大鼠合笼。发现阴栓的那天记为孕0天。戊四氮组，连续15天给予受精后的雌鼠腹膜内注射35 mg/kg的戊四氮。盐水组，给予受精后的雌鼠腹膜内注射相应量的生理盐水。正常对照组孕鼠不给于任何处理。在妊娠15.5天，所有孕鼠给予10%的水合氯醛麻醉后，剖腹取出胚胎脑组织。一部分胚胎脑通过Western Blot测定糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白的表达水平。其余胚胎脑通过免疫组织化学测定磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白的表达水平及分布。 结果：1行为学观察发戊四氮(PTZ)组大鼠于腹腔注射PTZ6-8天开始出现点头、洗脸等动作，症状逐渐加重，相继出现肌阵挛性发作但未站立；肌阵挛性发作伴站立；翻转侧位倒地，阵挛-强制性发作；翻转背部倒地，泛发性阵挛-强制性发作。妊娠期孕鼠给予35mg/kg的戊四氮可以诱导癫痫发作。盐水组和正常对照组大鼠无癫痫作。 2 Western blot结果戊四氮(PTZ)组胚胎脑组织磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白表达水平(1.069±0.411)较NS组(0.602±0.293)明显升高(P<0.05)。戊四氮(PTZ)组胚胎脑组织磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白表达水平较NC组(0.630±0.306)明显升高(P<0.05)。NS组和NC组之间比较无统计学意义(P>0.05)。胚胎脑组织中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达在NC组(1.142±0.339)、NS组(1.100±0.309)、PTZ组(1.287±0.345)之间无统计学差异(P>0.05)。 3免疫组化结果磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)在胚胎脑组织中的阳性细胞显示为棕褐色，主要在细胞的胞浆内表达，主要分布在皮层区。戊四氮(PTZ)组磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白在皮层区表达的阳性细胞数(47.583±3.680)较盐水(NS)组(27.333±2.20)明显升高(P<0.05)。戊四氮(PTZ)组磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白在皮层区表达的阳性细胞数(47.583±3.680)较正常对照组(NC)组(29.083±3.942)明显升高(P<0.05).糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)蛋白在皮层表达的阳性细胞数在正常对照组(29.083±3.942)和盐水组(27.333±2.20)之间无统计学差异(P>0.05)。 结论：1通过腹膜内注射戊四氮(35mg/kg)可以诱导妊娠大鼠癫痫发作。 2戊四氮组胚胎脑组织中磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白表达水平较NC组和NS组明显升高。戊四氮组胚胎脑组织中磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白在皮层区表达水平较NS组和NC组明显升高。妊娠期癫痫发作可能影响了胚胎脑皮层的发育，而磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(P-GSK-3β)蛋白可能起关键作用。
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