摘要
目的：建立小鼠哮喘气道重塑模型;初步探讨平喘固本合剂对小鼠哮喘模型的气道慢性炎症及重塑的作用及相关机制,为防治哮喘气道重塑提供新的研究依据。 方法：健康雌性昆明系小鼠50只随机分为五组,每组10只,正常对照组(A)、哮喘组(B)、平喘固本合剂干预组(C)、布地奈德雾化干预组(D)、联合治疗干预(E)。B、C、D、E组小鼠采用卵清白蛋白(OVA)和氢氧化铝粉的复合制剂致敏、OVA雾化激发建立哮喘小鼠模型,并分别给予C、D、E组不同干预治疗。对各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中各种细胞进行分类并计数,肺组织病理切片行HE染色后观察气道重塑情况并且采用Image-ProPlus6.0病理图像分析软件测定气道管壁厚度及管壁面积,采用免疫组织化学法检测核因子-κB(NF-κB)、血管内皮转化因子(VEGF)的表达水平。数据采用A_NOVA检测进行组间分析,LSD检验进行组内两两比较。 结果：①A组小鼠无喘息症状;B组小鼠喘息症状明显加重,且皮毛暗淡;C、D、E组有喘息症状,但均较B组轻;②HE染色显示所有药物干预组较单纯哮喘模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜气道组织水肿、上皮细胞脱落等表现明显减轻。其中以D和E组最为明显;③B组BALF中细胞总数,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞比例均高于其他各组,差别有统计学意义(P＜0.01);A组低于其它各组,差别亦有统计学意义(P＜0.01.);C组与D组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞数无明显统计学差异(P＞0.01)与哮喘B组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01)④图像分析结果显示,Wat/Pi(μm2/μm):各组气道管壁的厚度分别为(6.61±1.14),(16.6±1.52),(11.57±1.26),(9.53±1.93),(8.56±1.35)μm2/μm,F=54.59,P＜0.01。A组显著低于B组、C组、D组、E组,差异有统计学意义(P分别等于0.000、0.000、0.000、0.012);C组高于D、E组,差异具有统计学意义(P分别等于0.009,0.000);D组与E组无明显统计学意义(P=0.193);B组显著高于A组、C组、D组和E组差异有统计学意义(P＜0.000)。⑤小鼠肺组织免疫组化结果显示,小鼠肺组织中VEGF阳性表达主要在气管粘膜上皮、支气管平滑肌、血管内皮及血管平滑肌,炎性细胞(主要是嗜酸性粒细胞)也有表达。平均光密度(IOD)测定:分别为(11.57±1.64,35.87±4.92,28.28±2.02,25.06±2.58,16.31±2.41F=85.45,P＜0.01),B组、C组、D组、E组中的VEGF光密度值均明显高于A组,差异具有统计学意义(P＜0.01);B组的光密度值明显高于C组、D组、E组,差异具有统计学意义(P＜0.01);D组的光密度值低于C组,差异具有统计学意义(P=0.036);E组的光密度值明显低于C组、D组,差异具有统计学意义(P＜0.01)。NF-κB主要表达在气道粘膜上皮细胞胞质内,分别为(16.52±2.04,20.88±0.78,19.57±1.21,18.32±0.93,17.66±0.78,F=14.73,P＜0.01)B组、C组、D组的平均光密度值均明显高于A组,差异具有统计学意义(P＜0.01);C组与D组、E组与A组无明显统计学差异(P=0.53,0.76);B组的平均光密度值明显高于C组、D组、E组,差异具有统计学意义(P=0.042,0.000,0.000)。 结论：运用OVA致敏及雾化的方法可以复制出慢性哮喘气道重塑的小鼠模型;哮喘时NF-κB、VEGF的表达水平均提高,可能有加重气道慢性炎症反应及引起气道结构改变的作用,参与气道重塑的发生;平喘固本合剂可以抑制气道炎症细胞的浸润,下调哮喘模型小鼠气道组织中NF-κB和VEGF的表达,达到抑制哮喘气道慢性炎症及重塑的作用。
NETL