摘要
目的： 研究羟基喜树碱(Hydrocamptothecin，HCPT)对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGFβ1、Smad3、smad7表达的影响，探讨其抗纤维化的作用机制，为HCPT将来应用于临床肝纤维化治疗提供一定的理论与实验依据。 方法： SD大鼠50只随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、HCPT低剂量组(C组)、HCPT中剂量组(D组)、HCPT高剂量组(E组)，每组10只。正常组给予生理盐水1ml/kg，腹腔注射，每周2次；模型组采用40％CCl4花生油溶液0.2ml/100g，腹腔注射，2次/周，复制大鼠肝纤维化模型；HCPT给药组除给予等量CCL4诱导肝纤维化外，同时给予不同浓度的HCPT腹腔注射(C组：0.25mg/kg，D组：0.5mg/kg，E组：1.Omg/kg)，3次/周。8周后处死大鼠，进行以下指标检测：①取肝脏相同部位用于石蜡切片，采用免疫组织化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGFβ1的表达；②取新鲜肝组织采用RT-PCR检测TGFβ1、Smad3、Smad7 mRNA的表达；③Western blotting检测肝组组织Smad3、Smad7蛋白的表达。 结果： 1、HCPT可抑制肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGFβ1蛋白的表达：与模型组相比较，正常对照组、中剂量及高剂量HCPT给药组Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGFβ1的蛋白表达均明显减少，差异具有统计学意义(Ⅰ型胶原：A-1.464±0.272、D-4.505±0.307、E-4.613±0.281 VS B-6.504±0.310，F=404.116；Ⅲ型胶原：A-1.464±0.272、D-4.168±0.809、E-4.157±0.598 VS B-6.132±0.322，F=139.393；TGFβ1：A-1.334±0.342、D-5.251±0.257、E-4.940±0.329 VS B-7.853±0.433，F=554.028；均P<0.05)。其中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达在中、高剂量HCPT给药组之间比较均无统计学意义(均P>0.05)。TGFβ1的表达则与HCPT浓度呈正相关。 2、HCPT能下调肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1、Smad3 mRNA的表达，上调Smad7 mRNA的表达：与模型组相比较，TGFβ1、Smad3 mRNA在正常组中表达明显低下，而Smad7 mRNA表达则明显升高；同时，低、中、高剂量HCPT给药组表达TGFβ1、Smad3 mRNA逐渐减少，表达Smad7 mRNA逐渐升高，差异具有统计学意义，并与HCPT给药剂量呈依赖性。(TGFβ1 mRNA；A-0.281±0.059、C-0.916±0.059、D-0.799±0.029、E-0.521±0.108 VS B-1.219±0.112，F=202.093；Smad3 mRNA：A-0.279±0.061、C-0.871±0.110、D-0.633±0.074、E-0.431±0.056 VSB-1.219±0.112，F=179.439；Smad7 mRNA：A-0.899±0.212、C-1.455±0.231、D-1.980±0.217、E-2.374±0.128 VS B-0.498±0.080，F=173.821；均P<0.05)。 3、HCPT可减少肝纤维化大鼠肝组织Smad3蛋白的表达，同时增加Smad7蛋白的表达：正常对照组、各HCPT给药组表达Smad3蛋白均较模型组显著下降，而表达Smad7蛋白均较模型组明显上升，差异具有统计学意义，并与HCPT给药剂量呈依赖性(Smad3：A-0.134±0.330、C-0.678±0.049、D-0.482±0.053、E-0.420±0.041 VS B-0.856±0.098，F=210.508；Smad7：A-0.345±0.113、C-0.605±0.048、D-0.797±0.061、E-0.988±0.180 VS B-0.101±0.063，F=105.400；均P<0.05)。 结论： HCPT对CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型具有防治作用，可减少细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达；其抗肝纤维化的机制可能与下调TGFβ1的表达、阻断TGFβ1/Smad信号传导通路有关。
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