摘要
小桐子是世界上重要的能源植物之一,油脂含量很高,含油率高达40%~60%,分子组成与石油十分相似且更加稳定,便于深加工成不同用途的专用油,已成为国际上研究最多的可生产生物柴油的能源植物之一。但由于小桐子细胞质浓,染色体小并且不易分散的特点,目前有关小桐子的细胞学研究很少见报道。但细胞学的研究可以解决在小桐子分子生物学研究中其它研究手段无法解决的问题,比如测序分析中的gap大小的估计,染色体的调控等。因而对小桐子进行细胞学研究,构建高分辨率的染色体图和核型图对进一步研究小桐子的染色体分子生物学奠定基础。 本文首先摸索出小桐子高分辨率细胞学图的建立方法,在此基础上以45SrDNA和端粒-DNA为探针,进行染色体荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH),建立了小桐子清晰、准确的核型图,并对45SrDNA在不同来源小桐子中的分布进行分析。主要结果如下: (1)在小桐子的染色体制片过程中,根尖的长短,预处理的时间和酶解相关因素对实验影响较大。小桐子根尖的长度在长度为1.5~2.0cm,0.002mol/L8-羟基喹啉预处理2h时,37℃酶解1.5h后得的染色体浓缩程度适宜,分散均匀,形态清晰,细胞分裂相较多,并且没有细胞质覆盖。小桐子花粉母细胞直径在2mm左右能获得较多粗线期染色体浓缩的分裂相。 (2)基于45SrDNA和端粒-FISH的核型分析,小桐子的核型公式为2n=2x=22=12m+10sm,平均臂比为1.784。小桐子染色体相对长度的变异范围在4.404-10.706之间,最长染色体与最短染色体的比值为2.431。 (3)45SrDNA在不同来源的小桐子染色体上分布没有明显差异,皆有四个45SrDNA位点,位于两对同源染色体的末端。且45SrDNA信号的分散程度与染色体的状态有关。