摘要
共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid, CLA），是一种不饱和脂肪酸，膳食中摄入的CLA具有抗癌、抗动脉粥样化、降低胆固醇、促进骨骼生长等功能, 目前，在工业合成的CLA往往异构体复杂，副产物的残留的安全性问题。直接添加可食用高产CLA的菌株，或通过该菌株生产高活性的单一CLA异构体作为食品添加剂，成为目前研究的热点。 为了获得高产CLA的可食用菌株，进一步工业化生产CLA用于食品添加。本论文自酸奶中筛选产CLA的菌株，经18SrDNA鉴定后，利用盐析、SephadexG-100、DEAE—纤维素离子交换层析，对其亚油酸异构酶进行分离纯化，利用酶活力和SDS-PAGE进行鉴定后，对筛选出的菌株进行离子束诱变和发酵条件的优化，结果表明： (1)从酸奶中筛选出一株产CLA较高菌株，经18SrDNA序列鉴定，该菌为酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae，亚油酸转化率为3.35%。 (2)经60~80%硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE—纤维素离子交换层析分离纯化后，经过酶活力测定和SDS-PAGE分子量检测，表明获得纯化的亚油酸异构酶，其分子量约为68.5kDa。 (3)以筛选的酿酒酵母菌为出发菌株，经离子束诱变、筛选，得到正、负突变菌株，经过传代培养得到一株稳定遗传的高产CLA正突变菌株。 (4)正突变菌株的最优发酵条件为: 培养时间为42h、起始pH值为5.0、接种量为4%、培养温度为40℃。在该优化条件下添加0.1%亚油酸，CLA的产量为0.0898mg/mL,CLA的转化率为21%。
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