摘要
目的： 本课题采用氯化锂-匹罗卡品化学诱导的方法建立慢性颞叶癫痫模型，研究新型抗癫痫药普瑞巴林对颞叶癫痫大鼠海马组织Bax和Bc1-2表达的影响，探讨普瑞巴林治疗癫痫的药理学机制，及对颞叶癫痫大鼠海马神经元的抗凋亡作用。 方法： 30只雄性SD大鼠按照体质量随机分为正常对照组、慢性颞叶癫痫模型组和普瑞巴林治疗组，每组10只。采用氯化锂-匹罗卡品化学诱导的方法建立慢性颞叶癫痫模型，当大鼠痫性发作达到V级且持续1小时后，腹腔给予硫酸阿托品和地西泮解除痫性发作。正常对照组以相同体积的生理盐水取代氯化锂和毛果芸香碱。持续观察3周后普瑞巴林治疗组给予腹腔注射普瑞巴林40mg/kg/天，连续三周。正常对照组、颞叶癫痫模型组大鼠给予等量生理盐水腹腔注射，疗程相同。采用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马区Bax和Bc1-2的表达情况。 结果： 1.匹罗卡品致痫后，大鼠呈现典型的三期行为学变化：急性期，潜伏期，慢性期。癫痫持续状态大鼠成模率86.7％，死亡率26.9％。癫痫持续状态60分钟后，存活大鼠2周后均出现自发性反复性癫痫发作，表明慢性颞叶癫痫模型造模成功，成模率为73.1％。经普瑞巴林治疗后，大鼠癫痫发作级别呈逐渐缓解趋势。 2.利用免疫组织化学染色分别对各组大鼠海马区Bax和Bc1-2表达进行检测。Bax和Bc1-2阳性细胞均为胞质、核膜阳性，呈棕黄色。实验结果显示：1)正常对照组大鼠海马区可见少量表达Bax阳性细胞；与对照组相比颞叶癫痫模型组大鼠海马可见大量Bax阳性细胞(P<0.05)；普瑞巴林治疗组大鼠海马Bax阳性细胞数明显少于模型组，但仍高于正常对照组，组间差异具有统计学意义(P<0.05)。2)正常对照组大鼠海马区可见少量Bc1-2阳性细胞；模型组大鼠海马Bc1-2阳性细胞数增多；普瑞巴林治疗组大鼠海马Bc1-2阳性细胞数显著增多且高于模型组，组间差异具有统计学意义(均P<0.05)。 3.利用免疫印迹技术对大鼠海马组织Bax和Bc1-2蛋白表达进行研究。结果显示：1)正常对照组大鼠海马组织仅见少量Bax表达；模型组大鼠海马组织Bax表达较对照组明显升高；经普瑞巴林干预后，治疗组大鼠海马Bax表达水平明显降低，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，但仍高于正常对照组(P<0.05)。2)正常对照组大鼠海马组织仅见Bc1-2少量表达；模型组大鼠海马Bc1-2表达水平显著升高；普瑞巴林治疗组大鼠海马Bc1-2表达水平明显升高，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论： 1本课题采用的氯化锂-匹罗卡品化学诱导的慢性颞叶癫痫大鼠模型造模较为成功，大鼠行为学改变符合人类慢性颞叶癫痫的发展规律，可应用于实验研究。 2凋亡调控基因Bax和Bc1-2在颞叶癫痫慢性期表达上调，表明Bax参与了癫痫大鼠海马神经元的凋亡机制，促进了神经元细胞凋亡。 3普瑞巴林有减轻癫痫发作次数、降低发作程度的作用，提示其可能有治疗癫痫的作用。 4普瑞巴林可能通过降低癫痫大鼠海马Bax的表达，上调Bc1-2的表达，从而抑制细胞凋亡，发挥神经元保护作用。
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