摘要
目的： 观察胰岛素、罗格列酮及两者联用对糖尿病大鼠脑组织微/小血管中低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)及β-淀粉样蛋白(1-40)(Aβ1-40)表达的影响;探讨药物干预影响糖尿病大鼠脑微/小血管中Aβ1-40清除的机制;观察病程对糖尿病大鼠脑组织微/小血管中Aβ1-40表达的影响。 方法： (1)将自发性2型糖尿病大鼠(Goto-Kakizaki，GK)按病程分为6月龄及3月龄两组，再将6月龄GK大鼠随机分为对照组(DM6)、罗格列酮干预组(DM6RSG)、胰岛素干预组(DM6Ins)、胰岛素联合罗格列酮干预组(DM6Ins+RSG)，3月龄GK大鼠(DM3)作为病程对照组，每组7只。 (2)免疫组织化学染色定位检测各组大鼠脑微/小血管上Aβ1-40及LRP-1的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测各组大鼠脑组织中Aβ1-40及LRP-1蛋白的表达量;RT-PCR定量检测大鼠脑组织中LRP-1 mRNA的表达。 (3)所有计量资料以均数±标准差（(x)±s）表示，采用SPSS17.0软件包对数据进行单因素方差分析，p＜0.05认为差异具有统计学意义。 结果： (1)大鼠脑微/小血管上Aβ1-40免疫组化结果: 各组大鼠脑微/小血管均可见Aβ1-40阳性表达，阳性反应产物呈棕色位于微/小血管平滑肌和血管内皮细胞处。与DM6组相比，DM6Ins组、DM6RSG组及DM3组Aβ1-40阳性表达强度减弱，见图4。与DM6组相比，DM6Ins组、DM6RSG组及DM3组Aβ1-40阳性表达血管数均明显减少(P＜0.05)，见表2。 (2)大鼠脑微/小血管上LRP-1免疫组化结果: 各组大鼠脑微/小血管均可见LRP-1阳性表达，阳性反应产物呈浅棕色位于微/小血管内皮细胞。与DM6组相比，DM6RSG组及DM6Ins+RSG组LRP-1阳性表达强度增强，见图1。与DM6组相比，DM6RSG组及DM6Ins+RSG组LRP-1阳性表达血管数均明显增加(P＜0.01)，DM6Ins组阳性血管数无明显变化(p＞0.05)，见表1。 (3) ELISA检测大鼠脑组织中Aβ1-40及LRP-1的表达量: ELISA定量结果显示，与DM6组相比，DM6Ins组、DM6RSG组及DM3组脑组织中Aβ1-40的表达量均明显减少(P＜0.05)，见图5。 与DM6组相比，DM6RSG组及DM6Ins+RSG组LRP-1在脑组织中总的表达量明显增加(P＜0.01)，见图2A。与DM6组相比，DM6Ins组及DM6Ins+RSG组LRP-1在脑组织细胞膜上的表达量明显增加(P＜0.01)，但DM6Ins组LRP-1在脑组织中总的表达量无明显变化((p)＞0.05)，见图2A和2B。与DM6Ins组相比，DM6Ins+RSG组LRP-1在脑组织细胞膜上表达明显增加(P＜0.01)，见图2B，但脑组织中总的表达量无明显变化(p＞0.05)，见图2A。 (4) RT-PCR检测大鼠脑组织中LRP-1mRNA表达: RT-PCR结果显示，与DM6组相比，DM6RSG组及DM6Ins+RSG组LRP-1mRNA表达相对光密度值升高，见图3A。LRP-1与GAPDH灰度比值比较，与DM6组相比，DM6RSG组及DM6Ins+RSG组LRP-1mRNA表达的相对灰度比值升高(P＜0.05)，DM6Ins组脑组织中LRP-1mRNA表达无明显变化(p＞0.05)，见图3B。 结论： (1)随糖尿病病程增加，Aβ1-40在脑微/小血管中沉积明显增多，提示糖尿病病程可加重Aβ1-40在糖尿病脑微/小血管中沉积。 (2)胰岛素可促使LRP-1从脑组织细胞胞浆内转移至胞膜并明显减少Aβ1-40在糖尿病大鼠脑组织微/小血管中的沉积。 (3)罗格列酮可上调LRP-1和LRP-1mRNA的表达并明显减少Aβ1-40在糖尿病大鼠脑组织微/小血管中的沉积。 (4)在糖尿病脑组织中，与胰岛素联用时，罗格列酮表现为增敏胰岛素诱导的LRP-1从脑组织细胞胞浆转移至胞膜的功能。
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