摘要
角膜损伤是犬临床眼科疾病中的常见类型，常出现角膜混浊、溃疡。持续性的角膜损伤存在易导致角膜穿孔或角膜血管翳、色素沉着，影响正常视力，严重者甚至会导致失明。目前宠物临床中针对犬角膜损伤疾病可采取的治疗措施有限。 羊膜本身具有抗炎、抗菌、抗病毒及抑制血管生成等特性，还能促进上皮细胞增长，这使其在人医眼科临床中的研究与应用日益广泛，但在犬眼科疾病中的应用研究还很少。胸腺素β4(thymosin beta4，Tβ4)能抑制细胞凋亡及炎症反应，减少角膜新生血管的形成，促进角膜细胞迁移及黏附。目前，羊膜移植联合Tβ4治疗犬角膜损伤的效果尚不清楚。因此，本实验设计羊膜移植联合Tβ4用于犬角膜损伤治疗，为寻求快速有效地犬角膜损伤治疗方法提供依据。 犬角膜上皮细胞采用组织块法原代培养，传至第三代的上皮细胞按5×105/mL接种于96孔板，培养基中添加不同浓度（0ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL）Tβ4，分别于37℃、5％CO2条件下培养24h和48h，采用CCK-8试剂盒测定角膜上皮细胞增殖情况，以光密度值表示。 选取成年健康杂交犬24只，对每只犬右眼使用0.5moL/mL NaOH溶液浸润的圆形滤纸片（直径6mm）作用1min，建立碱烧伤模型。模型建立当天为第0d。实验犬随机分为4组，即空白组、羊膜移植组、Tβ4组和羊膜移植联合Tβ4组。羊膜移植组及羊膜移植联合Tβ4组碱烧伤模型后(d0)实施羊膜移植手术;于实验的d1～10，Tβ4组及羊膜移植联合Tβ4组每天使用1μg/μL Tβ4滴眼液，而空白组和羊膜移植组每天使用无菌PBS液点眼，同时各实验犬每天使用氧氟沙星滴眼液点眼。采用裂隙灯拍摄角膜照片，观察角膜损伤修复情况，并对角膜混浊度及角膜新生血管评分。 实验结果表明:1～50ng/mL Tβ4促进犬角膜上皮细胞增殖呈现剂量依赖性的作用。50ng/mL Tβ4促进角膜上皮细胞增殖效果高于其它各组(P＜0.05)。100ng/mL Tβ4对犬角膜上皮细胞增殖呈现促进作用，与空白组相比差异性显著(P=0.00)。Tβ4作用48h后角膜上皮细胞增殖效果优于作用24h的角膜细胞增殖。羊膜移植联合Tβ4在犬角膜碱烧伤模型中的使用，能有效促进角膜损伤修复，降低角膜混浊度，抑制角膜新生血管。对角膜混浊的的评分结果分析表明，d1～10羊膜移植组及羊膜移植联合Tβ4组评分显著低于对照组和Tβ4组(P＜0.05)。对角膜新生血管评分结果分析表明，羊膜移植组d3～10评分均高Tβ4组及羊膜移植联合Tβ4组(P=0.00 and0.00)。在d5-10，Tβ4组和羊膜移植联合Tβ4组角膜新生血管评分无显著性差异(P=0.08)，而与空白组和羊膜移植组相比均存在显著性差异(P＜0.05)。 可见，羊膜移植联合Tβ4能有效抑制角膜损伤后的炎症反应及角膜新生血管，降低角膜浑浊度，促进角膜损伤修复，是治疗犬角膜损伤的一种有效方法。
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