摘要
长蛇鲻是我国主要经济鱼类之一，年产量大，其鱼肉蛋白质酶解后可得到体外对血管紧张素转化酶(ACE)具有抑制作用的降血压多肽，然而从酶解液中分离纯化降血压多肽是一个复杂繁琐的过程。本文以生物相容性良好的磁性壳聚糖微球作为固定化载体，偶联固定化猪肺粗提ACE作为亲和配基，对长蛇鲻酶解液中降血压肽组分进行分离纯化，为降血压肽分离纯化技术提供一定的技术支持和理论基础。 采用乳化交联法制备了磁性壳聚糖微球，并确定最优制备工艺条件为:醋酸溶液浓度为3％，壳聚糖溶液浓度为10 mg·mL-1，水油相之比为1∶6，搅拌速率为800 rpm。对磁性微球进行性质表征可知，微球平均粒径为901nm，粒径均一，并包裹了Fe3O4磁性纳米粒子， Fe3O4含量约为28％，呈超顺磁性，磁响应性良好，可快速分离和富集。 采用环氧氯丙烷对磁性壳聚糖微球进行环氧基修饰活化，并确定最优活化条件为:NaOH溶液浓度为0.9 mol·L-1，环氧氯丙烷体积分数为40％，NaBH4浓度为0.5 g·L-1，反应温度为40℃，反应时间为4h。此时，微球表面环氧基密度可达159.23μmol·g-1，活化后的微球可应用于酶的固定化。 以环氧基活化的磁性壳聚糖微球为固定化载体，对猪肺租提血管紧张素转化酶(ACE)进行固定化，并确定固定化最优工艺条件为:pH为8.3，反应温度为50℃，反应时间为1.5 h，酶液蛋白浓度为6 mg·mL-1。最优条件下，固定化酶活力为0.048 U·g-1。与游离酶相比，固定化酶pH稳定性、热稳定性均得到了提高，具有较好的重复操作稳定性和储藏稳定性。 以固定化ACE的磁性壳聚糖微球为亲和载体，对长蛇鲻酶解液中降血压多肽组分进行一步亲和吸附实验。研究结果表明，经亲和吸附后，酶解液ACE抑制率从71.50％提高到了82.06％。采用高效液相色谱对吸附前后酶液进行分析，色谱结果跟ACE抑制活性检测结果吻合，表明磁性壳聚糖亲和载体可应用于长蛇鲻中降血压多肽的快速分离纯化。
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