摘要
背景: 抗代谢药硫唑嘌呤(azathioprine，AZA)在临床上常用于器官移植、急性白血病、自身免疫疾病和慢性炎症性肠病的治疗。由于该药治疗窗狭窄，易出现肝脏损害、血液毒性及胃肠紊乱等不良反应，从而导致治疗中断或失败。研究发现，硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)，三磷酸肌苷焦磷酸酶(ITPA)的活性和基因多态性与AZA所致不良反应相关，但仅能解释部分AZA所致的不良反应。次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)及次黄嘌呤磷酸脱氢酶(IMPDH)是AZA代谢过程中的重要代谢酶，该两种酶是否和AZA所致的不良反应相关尚不清楚。 目的: 本项目拟研究AZA代谢酶HGPRT及IMPDH活性和多态性与AZA所致不良反应的关系，以便为临床合理使用AZA提供理论和实验依据。 方法: 本研究选择了86例正在服用或曾经服用过AZA的肾移植受者以及304例健康志愿者作为研究对象，回顾性研究此86例肾移植受者发生不良反应情况，分析不良反应发生的高危因素。建立高效液相色谱法(HPLC)测定人红细胞中HGPRT活性，采用直接测序法检测了HGPRT IVS6-12C＞A、IMPDHⅠ型中rs2278293、IMPDHⅡ型中rs11706052的基因型，采用限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法，测定了IMPDHⅠ型中rs2278294的基因型，结合肾移植受者发生不良反应的情况，系统地分析了IMPDH和HGPRT活性和基因多态性与AZA所致不良反应的关系。 结果: 86例入选患者中，共有36例患者出现AZA所致的不良反应，其中有14例为血液毒性、11例为肝脏毒性、9例为胃肠道反应、3例为流行性感冒样症状，给予减剂量或停药或对症处理后均能自行恢复。不良反应发生率高达41.86％。男性患者服用AZA后所致肝脏损害的风险是女性患者的9.670倍(p＜0.05)。其他非遗传性机体因素和合并用药不会增加AZA所致不良反应的风险。 本研究中，86例肾移植受者HGPRT活性范围为44.59-262.16 U，平均为100.17±33.50U，健康受试者HGPRT活性范围为28.43-153.65 U，平均为99.30±17.21U，均呈正态分布。两组HGPRT活性均值差异无统计学意义(P＞0.05)。健康受试者和肾移植受者的HGPRT高活性、低活性和正常活性分布的差异有统计学意义(P＜0.01)，肾移植受者组的HGPRT低活性频率明显高于健康受试者组(P＜0.05)，正常活性频率则明显低于健康对照组(P＜0.05)。 入选肾移植患者中发现2例HGPRT IVS6-12C＞A突变体，突变频率为2.3％。而健康受试者中未发现突变，分析发现HGPRT活性与基因型之间无明显相关性(P＞0.05)。流行性感冒样症状组患者的平均HGPRT活性明显高于肾移植对照组（147.47±101.24U vs100.46±29.31U，p＜0.05），而血液毒性组、肝脏毒性组、胃肠道反应组与肾移植对照组比较，活性差异无统计学意义。AZA所致不良反应与HGPRT基因多态性之间没有明显相关性(P＞0.05)。 肾移植受者组IMPDH rs2278293、rs2278294、rs11706052突变频率分别为9.20％，68.97％和6.90％，健康受试者组则分别为14.14％、77.96％和9.87％。两组间各位点的突变频率差异均无统计学意义(p＞0.05)。但两组间rs2278294基因型分布差异具有统计学意义(p＜0.001)，肾移植受者组的GA基因型频率明显高于健康受试者组(p＜0.01)，AA基因型频率则明显低于健康受试者组(p＜0.001)。rs2278294与AZA所致血液毒性呈明显相关性(P＜0.05)，rs2278294突变型杂合子会导致AZA所致血液毒性的发生，而rs2278293、rs11706052突变型与AZA所致不良反应没有相关性(P＞0.05)。 因此，在服用AZA之前，测定患者HGPRT活性，筛选出HGPRT高活性者有利于避免AZA所致流行性感冒样症状不良反应的发生，此外，测定IMPDH rs2278294基因型，筛选出rs2278294突变型杂合子有利于避免AZA所致的血液毒性。另外对于男性患者，服用AZA过程中，更应该密切关注肝功能的变化，以避免肝脏不良反应的发生。
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