丙酮酸羧化酶缺陷对果蝇发育的影响及其分子机制的初步探讨

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中文摘要：p38信号通路在调控细胞应激反应过程中有着重要的作用，而MK2在外界条件刺激下可以被p38信号通路激活。我们通过荧光双向凝胶电泳实验发现，CG1516是MK2的作用底物。果蝇CG1516能编码生成丙酮酸羧化酶，果蝇CG30010是一个功能未知的基因。在本实验中，我们利用P-element转座可以使目的基因进行不精确剪切的原理得到了一株CG1516的突变体果蝇，并将其命名为CG1516Ex65，与此同时，我们还得到了一株CG30010的突变体果蝇，我们将其命名为CG30010Ex41。这两株突变体的表型是其纯合突变体自交产生的幼虫在其发育晚期死亡。在CG1516Ex65突变体中CG1516mRNA表达水平显著降低，并且没有检测到CG1516蛋白质的表达;突变体CG30010Ex41中CG30010mRNA和CG1516蛋白质表达水平显著降低。因为p38和MK2突变体都有抗氧化缺陷，在我们得到的两株纯合突变体中，其抗氧化能力也都显著下降。纯合CG1516Ex65突变体果蝇中丙酮酸羧化酶活性降低。通过免疫荧光技术我们也观察到了纯合突变体果蝇胚胎中的丙酮酸羧化酶分布减少。通过在两株突变体果蝇中都分别过表达CG1516和CG30010，我们发现CG1516Ex65纯合突变体自交产生的幼虫在其发育晚期死亡是由于其体内丙酮酸羧化酶缺乏造成的。此外，我们还发现，CG1516和CG30010共定位于线粒体基质，并且两者在mRNA和蛋白质水平上都有相互作用。因为果蝇丙酮酸羧化酶的氨基酸序列在人和小鼠中是很保守的，本文利用果蝇作为实验动物模型，应用分子生物学和细胞生物学及遗传学的手段研究CG1516在果蝇发育中的作用，为不久的将来人类丙酮酸羧化酶缺乏症的治愈提供更多的实验依据。

作者：

吴艳丽

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关键词：

果蝇幼虫发育分子机制动物模型丙酮酸羧化酶缺陷

授予学位：

硕士

学科专业：

细胞生物学

导师：

周化民、陈建明

学位年度：

2013

学位授予单位：

厦门大学

语种：

中文

中图分类号：