摘要
目的： 本研究应用野百合碱(MCT)建立PAH大鼠模型,早期给予贝前列素及辛伐他汀干预治疗3周,通过观察各组大鼠一般情况、肺血流动力学及肺组织形态学改变,评估联合用药对肺动脉高压大鼠的肺保护作用优于单独用药。 方法： 1.实验动物分组及药物干预:40只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为5组,每组8只:①对照组(C组):颈背皮下注射生理盐水1次,正常饲养;②肺动脉高压模型组(P组):野百合碱(60mg/kg)颈背部皮下注射1次,并于注射当日起连续给予等体积生理盐水灌胃(约1.0～1.5ml/日)21天;③贝前列素组(B组):野百合碱(60mg/kg)颈背部皮下注射1次,并于注射当日起连续给予贝前列素(每日100ug/kg)混悬液灌胃21天;④辛伐他汀组(S组):野百合碱(60mg/kg)颈背部皮下注射1次,并于注射当日起连续给予辛伐他汀(每日2mg/kg)混悬液灌胃21天;⑤联合用药组(Com组):野百合碱(60mg/kg)颈背部皮下注射1次,并于注射当日起连续给予贝前列素(每日100ug/kg)混悬液和辛伐他汀(每日2mg/kg)混悬液灌胃21天。 2.于注射野百合碱后第22天行颈内动脉插管测定心率(HR)和体循环平均动脉压(MAP),肺动脉插管测定肺动脉平均压(mPAP);分离心脏,沿室间隔分离右心室,分别称量右心室、左心室加室间隔,计算右心室肥厚指数(RVHI)。 3.肺组织切片行HE染色,观察肺组织形态学变化;行地衣红Orcein染色,应用图像分析系统测定并计算各组大鼠肺中型动脉(外径51～150μm)、小动脉(外径15～50μm)管壁中膜肥厚百分比(WT%)。 4.采用SPSS17.0统计软件进行统计分析,单因素方差分析比较两组间差异,以P＜0.05为差异具有统计学意义。 结果： 1.贝前列素、辛伐他汀早期干预对MCT诱导PAH大鼠一般情况的影响 从注射MCT2周后开始,P组、S组的部分大鼠开始出现体毛暗淡无泽、反应迟钝、活动度下降、虚弱的表现;在注射MCT第18天,P组1只大鼠不明原因死亡,解剖后可见肺组织散在点片状出血,胸腔、腹腔积液,肝脏淤血肿胀。注射MCT1周时,C组(256.7±11.58)大鼠体重即出现高于P组(236.51±10.79)、B组(234.76±11.79)、S组(236.00±8.14)和Com(242.76±13.20)组的情况,差异具有统计学意义(P＜0.05);注射MCT2周时,P组(267.09±12.95)大鼠体重明显低于Com组(284.61±18.53)(P=0.032);3周研究终点时,与P组4291.94±14.58)大鼠比较,B(311.33±19.66)组、S组(312.59±19.22)、Com组(323.69±20.29)大鼠体重均明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05),Com组体重较B组、S组有增加的趋势,但差异无统计学意义(P值分别为0.182和0.245)。 2.贝前列素、辛伐他汀早期干预对MCT诱导PAH大鼠血流动力学、右心室肥厚指数(RVHI)的影响 C组、P组、B组、S组、Com组大鼠之间HR(470.63±28.86、482.29±11.66、459.88±20.22、479.29±32.70、477.88±30.48)和MAP(102.87±4.88、99.40±3.65、98.60±8.82、104.28±9.30、99.72±7.84)均无显著差异(P＞0.05);与C组(16.54±3.11,0.26±0.03)大鼠相比较,P组(35.44±5.68,0.41±0.05)、B组427.43+3.72,0.35±0.03)、S组(29.94±4.41,0.36±0.03)、Com组(23.09±3.90,0.32±0.03)大鼠mPAP、RVHI均显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与P组大鼠相比较,B组、S组、Com组大鼠mPAP、RVHI均降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),但仍高于C组大鼠(P＜0.05);Com组mPAP、RVHI较单药干预的B组、S组均降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),B组mPAP、RVHI较S组略降低,但差异无统计学意义(P＞0.05)。分析大鼠右心指数与肺动脉平均压呈正相关(r=0.794,a=0.171,b=0.006,P＜0.01)。 3.贝前列素、辛伐他汀早期干预对MCT诱导PAH大鼠肺血管组织形态学观察 光镜下观察肺组织HE染色可见P组大鼠肺组织切片肺中小型动脉管壁明显增厚,中膜平滑肌增生肥厚,管壁不规则增厚,管腔狭窄,肺间质可见充血水肿,血管周围多见炎性细胞浸润明显。 光镜下观察肺组织Orcein染色可见P组大鼠肺中、小型动脉管壁增厚、管腔狭窄,内弹性膜呈“波浪状”改变,内外弹性膜之间中膜平滑肌增生重塑明显;与C组(10.15±1.52,12.20±1.79)大鼠相比,P组(35.95±4.03,42.79±5.87)、B组(18.46±2.05,26.74±2.41)、S组(17.29±2.12,28.24±1.86)、Corn组(14.23±2.41,17.39±3.25)大鼠肺中、小型动脉中膜厚度百分比(WT%)均增高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与P组大鼠相比,药物干预的B组、S组和Com组大鼠肺中、小动脉WT%显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),但仍高于C组(P＜0.05);B组、S组和Corn组之间比较,Com组大鼠肺中小动脉WT%低于B组、S组大鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05),B组和S组大鼠WT%无明显差异(P＞0.05)。 结论： 1.开胸直视下肺动脉插管,测量大鼠肺动脉平均压的方法具有可操作性,所得的实验数据准确可靠。 2.早期应用贝前列素和辛伐他汀,能够延缓野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺动脉平均压升高及肺血管重构,减轻右心室肥厚,联合用药疗效优于单独用药。 3.应用贝前列素3周后,对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠的心率和体循环压无明显影响。
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