摘要
炎症性肠病(IBD)是胃肠道的一种慢性的，易复发的炎症性疾病，有两种主要形式:克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。IBD的病因和发病机制比较复杂，诊断和治疗也相当棘手，因此新型分子治疗策略的研究是当今热门课题之一。活化的巨噬细胞在IBD发病机制中，尤其是在CD中起主要推动作用。巨噬细胞活化后，分泌大量促炎因子，引发炎症事件和组织损伤，与此过程相关的最重要的药物靶点之一是肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。 抗TNF-α药物多为抗体和可溶性受体，但蛋白大分子药物自身存在的缺陷限制了该类药物的广泛应用。本论文使用反义寡聚核苷酸(ASO)抑制技术，通过解决限制反义技术发展的靶向输送问题，来达到治疗IBD的目的。 为靶向输送ASO至活化的巨噬细胞，首先合成半乳糖修饰的低分子量壳聚糖(gal-LMWC)，构建纳米核酸给药系统（gal-LMWC/ASO复合物）。体外转染实验证明在活化的巨噬细胞中，gal-LMWC/ASO复合物的转染效率显著高于静息的巨噬细胞，且转染机制主要是通过巨噬细胞半乳糖受体(MGL)介导的受体内吞作用。 将纳米核酸给药系统通过原位灌肠方式应用于结肠炎模型中，定量检测实验和免疫荧光结果证明gal-LMWC/ASO复合物能够在炎症小鼠的结肠粘膜固有层富集，并成功输送ASO至固有层巨噬细胞，而在正常小鼠的结肠巨噬细胞中含量很低。 分别构建三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠急性结肠炎模型和CD4+CD45RBhi T细胞免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠导致的慢性结肠炎模型，进一步研究gal-LMWC/ASO复合物在两种结肠炎模型中的治疗效果。gal-LMWC/ASO复合物原位灌肠给药后，两种结肠炎模型小鼠的结肠TNF-α在蛋白水平和mRNA水平均得到抑制。结肠炎相关前炎症因子、Th1炎症因子和Th17炎症因子(白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-23和IL-17）也得到显著抑制。 纳米核酸给药系统有效缓解了两种模型中的结肠炎症状。结肠炎小鼠经gal-LMWC/ASO复合物灌肠给药后，体重下降得到恢复，病变活动度(DAI)评分降低，结肠肉眼观察无明显炎症，髓过氧化物酶(MPO)表达水平下调，病理分析显示和正常结肠无异。同时，gal-LMWC/ASO复合物将结肠炎小鼠粪便α-1抗胰蛋白酶（AAT）含量降至正常小鼠水平，有效抑制肠道蛋白丢失现象。 纳米核酸给药系统经原位灌肠对小鼠结肠炎显示了良好疗效，但给药方式可能会限制其临床应用，因此尝试构建包裹gal-LMWC/ASO纳米颗粒的口服靶向结肠制剂，以能被结肠细菌酶特异降解菊糖为主要原材料，成功制备微球，并用肠溶衣包裹外层，取得初步结果，具有应用前景。 白芨是治疗溃疡性结肠炎的一味传统中药，但由于成分复杂，药效分子和具体的作用机制不明确，限制了其发展。研究发现白芨提纯物白芨多糖(BSP)通过对活化的巨噬细胞的免疫调节作用，从而抑制溃疡性结肠炎相关的Th2细胞因子的表达，有效遏制噁唑酮诱导的小鼠结肠炎。 综上，论文以活化巨噬细胞为目标，开发了针对活化巨噬细胞的核酸药物靶向输送系统，结合反义抑制技术，有针对性的抑制了重要炎症因子的表达，在结肠炎动物模型的体内实验中，获得了良好的治疗效果。同时，论文还探索了传统中药白芨有效成分BSP对活化巨噬细胞的免疫调节作用，并在炎症性肠病模型的治疗中的效果显著。论文为以活化巨噬细胞为靶点的炎症性肠病和其他炎症性疾病的治疗提供了重要的实践依据和理论基础。
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