摘要
精胺（Spm）、亚精胺（Spd）和它们的二胺前体腐胺（Put）是小分子脂肪族多聚阳离子，广泛存在于植物细胞中，与植物生长发育、形态建成和对逆境响应密切相关。一氧化氮（NO）是一种植物细胞信号分子，在调节种子萌发、根系发育、气孔关闭、防御基因的表达和程序性细胞死亡过程中起着关键作用。业已证实，多胺可诱导植物组织产生NO，然而诱导机理仍不清楚。多份研究报告指出，植物组织的多胺氧化酶在多胺诱导NO产生中有作用，然而仍缺乏相关的理化证据。 本研究以大豆子叶节愈伤组织悬浮细胞为材料，采用外源多胺（PAs）、多胺氧化酶抑制剂-氨基胍（AG）、哺乳动物细胞一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、H2O2清除剂（CAT、POD）、化学性缺氧剂-连二亚硫酸钠（SDT）及H2O2淬灭剂-二甲基硫脲（DMTU）处理，以DAF-FMDA为NO专性荧光探针，用激光共聚焦扫描显微技术，检测多胺诱导大豆子叶节愈伤组织悬浮细胞产生NO的变化。结果表明： （1）三种外源多胺（0.05 mM腐胺、亚精胺和精胺）都可迅速地诱导大豆子叶节愈伤组织悬浮细胞产生NO荧光，且没有迟后期。 （2）在多胺孵育的同时添加NO专性清除剂0.1 mM cPTIO（2,4-羧基苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物），可强烈抑制细胞的 NO荧光，表明此荧光的NO特性。 （3）在多胺处理前用多胺氧化酶抑制剂AG孵育，可消弱细胞的NO荧光，相对应的是细胞二胺氧化酶（CuAO）活性被强烈抑制；而用1.0mM L-NAME孵育细胞，细胞NO荧光可被抑制但不影响CuAO活性。 （4）用0.1mM CAT和0.05mM DMTU二种H2O2清除剂处理悬浮细胞，都可明显减弱大豆悬浮细胞产生的NO荧光，而0.1mM POD消弱作用不明显。 （5）用化学性缺氧剂SDT处理，使细胞处于厌氧状态，发现可明显抑制大豆子叶节愈伤组织悬浮细胞NO荧光产生，荧光强度随SDT浓度的增加而下降。而SDT对NO供体硝普钠（SNP）所诱导的NO荧光无明显的抑制作用。 （6）在多胺处理前，若用1.0mM SDT孵育细胞，可明显减弱三种多胺对NO的诱导产生。 本研究首次采用大豆悬浮细胞，在细胞学水平上得到 PAs可诱导NO产生的证据，其次初步证实在PAs诱导大豆愈伤组织悬浮细胞产生NO的过程中有氧分子或H2O2的参与，且可能与多胺氧化酶有关。本文为PAs介导的信号传递和NO作为PAs作用的一个潜在介导者研究提供了新的证据。
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