摘要
第一部分:尿酸对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用 目的：评价尿酸对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用。 方法：采用SH-SY5Y细胞制作6-OHDA损伤的帕金森病细胞模型，分为对照（DMEM）组、6-OHDA（50μmol.L-1）组、尿酸组（200μmol.L-1）以及6-OHDA（50μmol.L-1）+尿酸组（25、50、100、200、400μmol.L-1)。预给尿酸0.5h后，6-OHDA作用6h、12h后分别以比色法检测细胞外乳酸脱氢酶（LDH）含量和MTT比色法检测细胞活性，倒置显微镜下观察细胞形态变化；6-OHDA作用14h后采用比色法检测细胞内还原性谷胱甘肽（GSH）含量的变化。 结果：50μmol.L-16-OHDA对 SH-SY5Y细胞作用6h，LDH释放显著增加（203.58±32.47%vs99.99±0.01%，P<0.01）；12h，细胞活性显著下降(51.68±9.02%vs100±3.56%，P<0.001)，细胞密度明显减少，细胞突起明显缩短，少数细胞皱缩成圆形，细胞间连接明显减少；200μmol.L-1尿酸对50μmol.L-16-OHDA作用6h时LDH释放增加有显著的减轻（133.63±11.35% vs203.58±32.47%，P<0.05），200和400μmol.L-1尿酸对6-OHDA作用12h时 SH-SY5Y细胞活性下降有显著的改善（82.61±7.18% vs51.68±9.02%、91.55±7.16%vs51.68±9.02%，P<0.01， P<0.01）；200μmol.L-1尿酸对6-OHDA作用12h的细胞形态变化有所改善，相比细胞密度较大、变圆细胞较少，细胞较饱满，细胞突起显著增长；50μmol.L-16-OHDA对 SH-SY5Y细胞作用14h时后，GSH含量显著下降（4.13±0.42μmol.L-1 vs7.40±0.86μmol.L-1， P<0.05），200μmol.L-1尿酸对6-OHDA作用14h时GSH含量下降有显著的改善（9.43±0.82μmol.L-1 vs4.13±0.42μmol.L-1，P<0.001）。 结论：尿酸对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用。 第二部分:尿酸对Akt/GSK3β信号通路的调节 目的：探讨尿酸对Akt/GSK3β信号通路的调节作用。 方法：采用 SH-SY5Y细胞制作6-OHDA损伤的帕金森病细胞模型，分为对照（DMEM）组、6-OHDA（50μmol.L-1）组、尿酸组（200μmol.L-1）以及6-OHDA（50μmol.L-1）+尿酸（25、50、100、200、400μmol.L-1)组，其中每组又分为LY294002（0μmol.L-1）和LY294002（5μmol.L-1）亚组；预先给予尿酸0.5h后，6-OHDA再作用4h、12h后，分别用Western blot法测定不同组别SH-SY5Y细胞Akt ser473位点和GSK3βser9位点磷酸化水平变化以及MTT比色法检测细胞活性。 结果：50μmol.L-16-OHDA作用于SH-SY5Y细胞4h后，与对照组相比，Akt ser473活化明显受抑制，即 Akt ser473位点的磷酸化水平下降（58.01±8.16% vs100.33±2.52%，P<0.01）；GSK3βser9失活明显受抑制，即GSK3βser9位点的磷酸化水平下降（40.67±23.33% vs99.67±5.51%，P<0.05）；而尿酸（200-400μmol.L-1）+6-OHDA组与6-OHDA组相比，Akt ser473位点的磷酸化水平和GSK3β ser9位点的磷酸化水平升高（84.81±5.62%、105.13±19.16%vs58.01±8.16%；122.89±38.28、150.41±63.46%vs40.67±23.33%，P<0.05, P<0.001，P<0.05，P<0.01），而尿酸+6-OHDA+LY组与尿酸+6-OHDA组相比， GSK3β ser9位点的磷酸化水平下降（55.68±39.46% vs115.89±40.49%， P<0.05）。50μmol.L-16-OHDA作用于SH-SY5Y细胞12h后，与对照组相比降低细胞的活性（58.94±5.16%vs100±5.26%，P<0.001），尿酸+6-OHDA组对 SH-SY5Y细胞活性下降有显著的提高（102.58±6.96%vs58.94±5.16%，P<0.001），而尿酸+6-OHDA+LY组与尿酸+6-OHDA组相比，SH-SY5Y细胞活性有所下降（71.41±3.15%vs102.58±6.96%, P<0.01）。 结论：尿酸对6-OHDA诱导的 SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用，与其调节Akt/GSK3β信号通路有关。
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