摘要
目的: 1、用HPLC色谱法分别建立不同采收时间承德山楂叶和山里红叶的指纹图谱,建立不同采收期的山楂叶和山里红叶中牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷、绿原酸、芦丁、牡荆素和金丝桃苷6种指标成分的含量测定方法,从山楂叶和山里红叶所含指标成分含量上对两种山楂属的药材进行比较研究,对各自所含指标成分的含量随时间的变化情况进行监测。 2、通过紫外-可见分光光度法建立不同采收时间承德山楂叶和山里红叶的总黄酮含量测定方法,对两种山楂属药材的总黄酮含量进行比较研究,对各自所含总黄酮含量随时间变化情况进行监测。 3、通过对承德山楂叶和山里红叶中牡荆素鼠李糖苷等6种指标成分含量和总黄酮含量进行测定,找出山楂叶和山里红叶的内在差异,并确立两种药材的最佳采收时间,为山楂叶和山里红叶更好的开发利用提供理论依据。 方法: 1、采用HPLC色谱法,用色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)、以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)-四氢呋喃(C)为流动相进行梯度洗脱:0~20~30~40~50min,A(90%~84%~84%~78%~74%)、B(8%~14%~14%~20%~24%)、C(2%~2%~2%~2%~2%);检测波长:340nm;流速1.0mL·min-1,柱温30℃;进样量10μL的色谱条件,分别建立山楂叶和山里红叶的指纹图谱,用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行指纹图谱相似度评价,确认各指纹图谱中共有峰的数目。 2、在建立上述HPLC色谱条件下,同时采用外标法分别建立山楂叶和山里红叶中牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷、绿原酸、芦丁、牡荆素和金丝桃苷6种指标成分含量测定方法。 3、采用紫外-可见分光光度法,以芦丁为对照品配制标准溶液,在500nm处通过NaNO2-Al(NO3)3-NaOH络合显色法,用外标法分别建立山里红叶和山楂叶的总黄酮含量测定方法。 结果: 1、山楂叶指纹图谱中共标出11个共有峰,各批次样品的指纹图谱匹配相似度均大于0.88;山里红叶指纹图谱中共标出12个共有峰,各批次样品的指纹图谱匹配相似度均大于0.86。 2、山楂叶和山里红叶两种药材6种指标成分以5月份含量最高,各产地5月均值(mg/g)如下:山楂叶:绿原酸12.95,牡荆素葡萄糖苷0.29,牡荆素鼠李糖苷8.63,芦丁0.14,牡荆素0.44,金丝桃苷1.53;山里红叶:绿原酸10.58,牡荆素葡萄糖苷6.06,牡荆素鼠李糖苷11.77,芦丁0.42,牡荆素0.23,金丝桃苷0.82。 3、山楂叶和山里红叶两种药材各月份总黄酮含量均值(mg/g)如下:山楂叶:5月245.92、6月100.0、7月80.25、8月122.34、9月95.00、10月80.35、11月70.16;山里红叶:5月161.02、6月80.07、7月72.24、8月107.82、9月93.31、10月70.00、11月73.92。 结论: 1、同一HPLC色谱条件下,对山楂叶和山里红叶指纹图谱的研究,找出了两者的内在差异,即山里红叶中绿原酸、牡荆素葡萄糖苷含量明显高于山楂叶,而牡荆素、金丝桃苷和总黄酮含量却低于山楂叶。化学成分的不同,必定会体现在临床疗效上的不同,因此,HPLC指纹图谱的建立能为临床更合理使用山楂叶提供参考; 2、通过对承德不同地方、不同月份山楂叶和山里红叶中牡荆素鼠李糖苷等6种指标成分以及总黄酮的含量测定,发现承德各地的山楂叶和山里红叶同种药材间,以兴隆各成分含量最高,而不同生长时间,含量差别较大,以5月和8月含量为最高,因此,如果以山楂叶和山里红叶入药为目的进行采集时,建议5月、8月采集。
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