摘要
目的：课题组前期的研究显示转录因子FoxO1调控的靶基因钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase，CASK)具有正向调节INS-1细胞钾离子刺激胰岛素分泌(KSIS)功能的效应。然而在胰岛β细胞内胰岛素囊泡的转运、锚定和出胞分泌各环节中，CASK是如何发挥其对于分泌的调节作用，其具体机制的研究有待于进一步深入。CASK在胰岛素分泌的调节过程的机制中，同胰岛素分泌有着多重联系的F-actin很可能参与到其中。本研究利用体外培养的大鼠INS-1细胞，通过过表达/干扰CASK的表达，来观察F-actin的变化。 方法：⑴体外培养大鼠INS-1细胞，使用定量PCR及Western blot对CASK RNAi片段及pEGFP-N2-CASK过表达质粒进行验证。⑵明确CASK在INS-1细胞中对胰岛素分泌功能的影响并且利用免疫荧光法探索CASK的作用部位。⑶使用免疫荧光法及F-actin特异性染色观察CASK对F-actin分布的影响。⑷使用瞬时转染、流式细胞仪以及F-actin特异性染色观察CASK对F-actin含量的影响。 结果：①干扰CASK后INS-1细胞KSIS功能显著降低(P＜0.01)，过表达CASK能够部分逆转棕榈酸导致的INS-1细胞KSIS功能下降(P＜0.05)，并且CASK在钾离子刺激下以细胞膜分布为主。②CASK同F-acfin可能共同在以细胞膜为主的区域协同调节胰岛素的分泌，CASK能够造成F-actin分布局限性聚集。③CASK的干扰或者过表达均不能引起F-actin的含量变化。 结论：⑴CASK对于INS-1细胞的KSIS功能具有正向调节作用。⑵CASK能够造成F-actin局限性聚集，从而使得其分布局限化，减弱了其阻碍锚定分泌的屏障作用，从而造成了胰岛素的分泌增加，这可能是CASK调节胰岛素囊泡的分泌的机制之一。⑶CASK对F-actin含量没有明显影响。
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